BN電(diàn)泳介紹及參考文獻

溫和膠，簡寫為(wèi)BN-PAGE（Blue Native PAGE），由Sch?gger等建立的一(yī)種電(diàn)泳系統，最初被用來分離牛心髒組織中線粒體上(shàng)的蛋白(bái)質複合體。由于在研究蛋白(bái)複合體上(shàng)的優勢，BN-PAGE被用于線粒體膜、類囊體膜、質膜等膜蛋白(bái)複合體的研究。在做植物(wù)類囊體膜的電(diàn)泳時，結合葉綠素的蛋白(bái)質複合物(wù)呈綠色，而不含葉綠素的呈藍色，因此又(yòu)稱之為(wèi)藍綠溫和膠電(diàn)泳。

Blue Native PAGE是最古老的Native-PAGE技(jì)術(shù)。在電(diàn)泳緩沖液和上(shàng)樣緩沖液中加入了考馬斯亮藍G-250，蛋白(bái)質表面結合了大量的考馬斯亮藍染料而帶上(shàng)負電(diàn)荷，這會(huì)導緻即使堿性蛋白(bái)（pI高(gāo)于7的蛋白(bái)）也會(huì)向陰極遷移。

Blue Native PAGE在分析蛋白(bái)質-蛋白(bái)質相(xiàng)互作用以及膜蛋白(bái)複合物(wù)方面有很大的優勢，其分離範圍在100KDa-10MDa。這種方法的缺點是：考馬斯亮藍與蛋白(bái)的結合起到(dào)了去垢劑的作用，可能(néng)導緻複合物(wù)的分離；并對化學發光(guāng)或蛋白(bái)質輔基的熒光(guāng)或熒光(guāng)染料的标記具有潛在的猝滅作用。

Clear Native PAGE是另外一(yī)種電(diàn)泳技(jì)術(shù)，這是BN-PAGE之後出現的一(yī)種技(jì)術(shù)。可以分離聚丙烯酰胺凝膠（PI小(xiǎo)于7）中的酸性水(shuǐ)溶性蛋白(bái)和膜蛋白(bái)。分辨率通(tōng)常低(dī)于BN-PAGE。但是，當考馬斯亮藍G-250染料妨礙進一(yī)步分析時，CN-PAGE具有優勢。例如，為(wèi)了測量催化活性（例如線粒體ATP合酶）或分離痕量的膜蛋白(bái)以進行熒光(guāng)共振能(néng)量分析，CN-PAGE比BN-PAGE更溫和。 CN-PAGE可以維持膜蛋白(bái)的超分子組裝，而BN-PAGE的結構會(huì)引起分解。可以通(tōng)過CN-PAGE檢測線粒體ATPase中具有酶促活性的寡聚體，但使用BN-PAGE則不能(néng)檢測。由于CN-PAGE中沒有帶電(diàn)的染料，因此蛋白(bái)質在電(diàn)場中的遷移完全取決于蛋白(bái)質的固有電(diàn)荷，等電(diàn)點低(dī)于7的酸性蛋白(bái)才能(néng)帶上(shàng)負電(diàn)荷正常電(diàn)泳。優點是條件(jiàn)相(xiàng)對溫和，在蛋白(bái)質組學研究中具有很大的優勢。 BN-PAGE和CN-PAGE的制膠緩沖液與電(diàn)泳條件(jiàn)相(xiàng)同，但是CN-PAGE的陰極緩沖液（内槽緩沖液）不含考馬斯染料，但将0.025％的洋地黃皂苷添加到(dào)了凝膠中。

1 Blue native PAGE

Hermann Schagger在Nature Protocol上(shàng)的經典方法。凝膠緩沖液使用咪唑配方。

2 Blue Native electrophoresis to study mitochondrial and other protein complexes

凝膠緩沖液使用Bis-Tris配方。

相(xiàng)關産品：RTD6139-0312 Blue/Clear 非變性凝膠電(diàn)泳試劑盒(U型闆3-12%預制膠，通(tōng)用型)

          RTD6139-0420 Blue/Clear 非變性凝膠電(diàn)泳試劑盒(U型闆4-16%預制膠，通(tōng)用型)
3 Advantages and limitations of clear-native PAGE

Hermann Schagger CN-PAGE的優缺點

4 BN系統非梯度凝膠（手灌膠） Non-Gradient Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis
相(xiàng)關産品：RTD6140 Blue/Clear 非變性凝膠電(diàn)泳試劑盒(手灌膠)

BN電(diàn)泳在更換為(wèi)無色電(diàn)泳緩沖液後，電(diàn)流基本在2-5mA，有些電(diàn)泳電(diàn)源如伯樂電(diàn)源有負載檢查功能(néng)，電(diàn)流過低(dī)（低(dī)于4mA） 會(huì)認為(wèi)沒有負載，報(bào)錯(cuò)E1錯(cuò)誤代碼，終止電(diàn)泳。解決方法是更換電(diàn)泳電(diàn)源，如使用國(guó)産電(diàn)源；另外可以調高(gāo)電(diàn)壓高(gāo)于300V，使得電(diàn)流不要低(dī)于4mA。