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Blue/Clear 非變性凝膠電(diàn)泳試劑盒(U型闆3-12%預制膠,通(tōng)用型)

Blue/Clear 非變性凝膠電(diàn)泳試劑盒(U型闆3-12%預制膠,通(tōng)用型)

産品編号:RTD6139-0312

産品規格:3-12%

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥1500

Blue/Clear 非變性凝膠電(diàn)泳試劑盒

   Blue/Clear Native PAGE Electrophoresis Kit  Ver.730852

貨号

名稱

包裝

RTD6139-0312

Blue/Clear非變性凝膠電(diàn)泳試劑盒(U型闆3-12%預制膠,通(tōng)用型)

10

RTD6139-0416

Blue/Clear非變性凝膠電(diàn)泳試劑盒(U型闆4-16%預制膠,通(tōng)用型)

10

貨品内容:

組份

貨号

名稱

規格

保存

1

RTD6138-0312

3-12% RealPAGE Native BN/CN 預制膠

10

4

RTD6138-0416

4-16% RealPAGE Native BN/CN 預制膠

10

4

2

BC500P

10×BN/CN PAGE電(diàn)泳緩沖液(幹粉)

500 ml

RT

3

PL114

4×BN/CN-PAGE蛋白(bái)上(shàng)樣緩沖液

1 ml

-20

4

BC270

2% G-250染料(電(diàn)泳用)

20 ml

4

5

BC260

5% G-250染料(上(shàng)樣用)

1 ml

4

6

說明書

一(yī)份

産品簡介:


Blue/Clear Native PAGE(BN/CN-PAGE)是一(yī)種從(cóng)生(shēng)物(wù)樣品(質膜,胞漿等)中分離分子量10 kD-10 M kD 範圍的蛋白(bái)質複合物(wù)的電(diàn)泳技(jì)術(shù)。其原理是用溫和去污劑(如 DDM,digitonin)将蛋白(bái)複合體從(cóng)細胞膜中以近似天然的狀态分離出來,Blue Native PAGE (BN-PAGE)是用考馬斯亮藍 G-250 代替 SDS與蛋白(bái)結合而使其帶負電(diàn)荷,根據蛋白(bái)分子量不同在 PAGE膠中得到(dào)分離;Clear Native PAGE(CN-PAGE)是電(diàn)泳緩沖液中不加入任何染料,電(diàn)泳中始終保持蛋白(bái)的天然電(diàn)荷和活性狀态,然而,其蛋白(bái)的分辨率要低(dī)于Blue Native PAGE。另外,BN-PAGE由于考馬斯亮藍G-250存在,使蛋白(bái)都覆蓋上(shàng)負電(diàn)荷,可以分離堿性蛋白(bái)(pI>7);而CN-PAGE隻适合于酸性蛋白(bái)(pI<7)的分離。

本産品包括BN/CN-PAGE制膠的所有成分,方便使用。可以用于分離分子量在 10 kD-10M kD 的蛋白(bái)複合體,樣品可以來于胞漿、細胞總裂解液、細胞膜、線粒體膜和葉綠體膜等。電(diàn)泳後可直接用于考染、銀(yín)染、Western 雜(zá)交、SDS-PAGE電(diàn)泳、蛋白(bái)純化、蛋白(bái)活性檢測等分析實驗,也可直接用于電(diàn)洗脫制備蛋白(bái)。

● 運輸和貯存:

本産品常溫運輸;組份按照(zhào)标簽溫度貯存;有效期一(yī)年(nián)。

使用說明:

1. 樣品制備:

   該試劑盒不含樣品制備的相(xiàng)關試劑,根據樣品種類選擇不同提取方法。植物(wù)類囊體BN樣品制備可以選擇植物(wù)類囊體膜提取試劑盒(貨号:RTU5002);動物(wù)總蛋白(bái)BN樣品制備可以選擇動物(wù)胞漿活性蛋白(bái)提取試劑盒(貨号:RTD8106);動物(wù)膜蛋白(bái)BN樣品制備可以選擇動物(wù)膜蛋白(bái)提取試劑盒(貨号:RTD8111,RTD8112);動物(wù)線粒體BN樣品制備可以選擇動物(wù)線粒體提取試劑盒(貨号:RTD8115和RTD8116)。


2. 電(diàn)泳:

2.1 拆開(kāi)預制膠包裝,将預制膠安裝在合适的電(diàn)泳槽中。

注:伯樂Mini IIIMini-PROTEAN Tetra Cell,天能(néng)VE-180,六一(yī)24K系列電(diàn)泳槽請确保密封條的安裝方向(下(xià)圖)。


六一(yī)其他系列,君意東方JY-SCZ2/4,百晶BG-verMINI等電(diàn)泳槽可以直接使用預制膠。

不兼容Thermol系列電(diàn)泳槽。

2.2 準備電(diàn)泳緩沖液:

将10×BN/CN PAGE電(diàn)泳緩沖液(幹粉)溶于500 ml滅菌水(shuǐ)中,徹底溶解,測定pH應為(wèi)7.0左右,不要調節pH。用前稀釋10倍即配成1×BN/CN PAGE電(diàn)泳緩沖液。

2.2.1 CN-PAGE電(diàn)泳:

陽極緩沖液和陰極緩沖液均直接使用1×BN/CN PAGE電(diàn)泳緩沖液進行電(diàn)泳。

2.2.2 BN-PAGE電(diàn)泳:

陽極緩沖使用1×BN/CN PAGE電(diàn)泳緩沖液,陰極緩沖液按照(zhào)下(xià)表配制:

 

1×藍色陰極緩沖液

 

150 ml

10×BN/CN PAGE電(diàn)泳緩沖液

15 ml

2% G-250 染料(電(diàn)泳用)

1.5 ml

超純水(shuǐ)

定容至150 ml

2.3準備樣品:

2.3.1 CN-PAGE電(diàn)泳:

總體積

10 μl

蛋白(bái)樣品

x μl

4×BN/CN-PAGE蛋白(bái)上(shàng)樣緩沖液

2.5 μl

超純水(shuǐ)

補至10 μl

 

不要加熱

2.3.2 BN-PAGE電(diàn)泳:

2.3.2.1 植物(wù)類囊體膜蛋白(bái)電(diàn)泳:

總體積

10 μl

 

含去垢劑樣品*

植物(wù)類囊體膜蛋白(bái)樣品

2%DDM增溶)

x μl

4×BN/CN-PAGE蛋白(bái)上(shàng)樣緩沖液

2.5 μl

5% G-250染料(蛋白(bái)上(shàng)樣)

1 μl

超純水(shuǐ)

補至10 μl

 

不要加熱

*植物(wù)類囊體膜蛋白(bái)電(diàn)泳中,含去垢劑樣品中染料加入按照(zhào)以下(xià)原則:

植物(wù)類囊體樣品中G250終濃度為(wèi)去垢劑終濃度的1/4。例如樣品中DDM(n-Dodecyl β-D-maltoside,β-DM, n-十二烷基-β-D-麥芽糖苷)終濃度為(wèi)2%,則需要G-250終濃度為(wèi)0.5%。10 μl蛋白(bái)樣品中需要加5% G-250染料1 μl。

2.3.2.2 動物(wù)線粒體BN樣品電(diàn)泳:

總體積

10 μl

 

含去垢劑樣品*

動物(wù)線粒體BN樣品

1%DDM增溶)

x μl

4×BN/CN-PAGE蛋白(bái)上(shàng)樣緩沖液

2.5 μl

5% G-250染料(蛋白(bái)上(shàng)樣)

0.25 μl

超純水(shuǐ)

補至10 μl

 

不要加熱

*動物(wù)線粒體BN樣品電(diàn)泳中,含去垢劑樣品中染料加入按照(zhào)以下(xià)原則:

動物(wù)線粒體BN樣品中G250終濃度為(wèi)去垢劑終濃度的1/8。例如樣品中DDM終濃度為(wèi)1%,則需要G-250終濃度為(wèi)0.125%。10 μl蛋白(bái)樣品中需要加5% G-250染料0.25 μl。


2.4電(diàn)泳過程;

2.4.1 CN-PAGE電(diàn)泳:

電(diàn)泳内外槽均使用1×BN/CN PAGE電(diàn)泳緩沖液。在電(diàn)泳槽的内槽内加入1×BN/CN PAGE電(diàn)泳緩沖液(讓電(diàn)泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕撥出預制膠梳子,用1ml吸頭沖洗加樣孔3次,随後在電(diàn)泳槽外槽加入适量的1×BN/CN PAGE電(diàn)泳緩沖液。

CN-PAGE電(diàn)泳

恒電(diàn)壓

起始電(diàn)流

結束電(diàn)流

電(diàn)泳時間

120V

10-15mA/闆膠

4-10mA/闆膠

50+min

注:冰浴電(diàn)泳

2.4.2 BN-PAGE電(diàn)泳:

BN-PAGE電(diàn)泳外槽使用1×BN/CN電(diàn)泳緩沖液;内槽開(kāi)始電(diàn)泳使用的是1×藍色陰極緩沖液,冰浴電(diàn)泳,等待電(diàn)泳指示前沿到(dào)達凝膠1/3處時,将電(diàn)泳緩沖液更換為(wèi)1×BN/CN電(diàn)泳緩沖液,繼續後續電(diàn)泳,因為(wèi)過多(duō)染料會(huì)影響蛋白(bái)在凝膠中的遷移以及蛋白(bái)後續的轉膜實驗。

BN-PAGE電(diàn)泳條件(jiàn)(一(yī)闆膠)

恒電(diàn)壓

起始電(diàn)流

電(diàn)泳時間

緩沖液

 

120 V

8-15 mA

20-25 min

1×藍色陰極緩沖液

冰浴電(diàn)泳

                        指示前沿至凝膠頂部三分之二處,更換内槽緩沖液為(wèi)1×BN/CN 電(diàn)泳緩沖液

恒電(diàn)壓

繼續電(diàn)泳時間

結束電(diàn)流

緩沖液

 

120 V

45 min +

3-5 mA

1×BN/CN電(diàn)泳緩沖液

冰浴電(diàn)泳

3. 轉膜:

BN-PAGE轉膜必須用PVDF膜,不能(néng)用NC膜,因為(wèi)NC膜與G-250結合非常緊密,不易去除。轉膜後PVDF膜上(shàng)的藍色染料可以用無水(shuǐ)甲醇漂洗去除。轉膜緩沖液推薦使用10×BN轉膜緩沖液(貨号:BC600P)。

4. 染色:

4.1 将電(diàn)泳後的PAGE膠取下(xià)放(fàng)入塑料容器(qì)中,加入适量FastBlue蛋白(bái)染色液或常規考馬斯亮藍染色液(以剛剛覆蓋過膠面為(wèi)适),條帶1-2分鍾即可見(jiàn)。

4.2 搖床常溫搖動10-15分鍾至條帶清晰可見(jiàn)。

4.3 加入适量蒸餾水(shuǐ)脫色,期間更換1-2次蒸餾水(shuǐ),搖床常溫搖動10-15分鍾至背景幹淨。

4.4 觀察保存結果。

5. 實驗示例:

BN-PAGE 3-12% Precast Gel
穩壓120V 1.5 h 1×BN/CN電(diàn)泳緩沖液 冰浴電(diàn)泳

BN-PAGE 4-16% Precast Gel
恒壓 120V 2 h 1×BN/CN電(diàn)泳緩沖液 冰浴電(diàn)泳



K562 膜蛋白(bái)BN-WB檢測
樣品:膜蛋白(bái)提取樣品用2%DIG和1%DM增溶( 貨号:RTD8111,動物(wù)膜蛋白(bái)提取試劑盒(細胞)) ,
胞漿蛋白(bái)CY做對照(zhào)
電(diàn)泳:3-12% BN預制膠(貨号:RTD6138-0312),穩壓200V 1×藍色陰極緩沖液至指示前沿距離膠上(shàng)沿2/3處,
更換為(wèi)無色1×BN/CN PAGE電(diàn)泳緩沖液,電(diàn)泳時間共83分鍾
膠預處理:膠浸泡于buffer中(12.5mM Tris,2%SDS,20%甘油,50mM DTT pH6.8),微波煮沸20秒(miǎo),37度15min後轉膜
轉膜:0.45μm PVDF膜,10×BN轉膜緩沖液(貨号:BC600P)稀釋為(wèi)1×BN轉膜緩沖液加20%甲醇,
恒流200mA  2小(xiǎo)時,未冰浴。
轉膜效果檢測:膜用麗春紅(hóng)染色液染色(貨号:RTD6301)有可見(jiàn)條帶,膠用FastBlue蛋白(bái)染色液染色
(貨号:RTD6202)幾乎無條帶,證明轉膜成功。膜用無水(shuǐ)甲醇清洗5分鍾去除膜上(shàng)藍色殘餘。
封閉:Western快速封閉液(貨号:WR5020)  RT  封閉10 分鍾;
圖1 一(yī)抗:兔單抗GAPDH 1:10000  RT 60min;羊抗兔IgG-HRP 1:5000 RT 60min,ECL曝光(guāng)6秒(miǎo)
圖2 膜使用Western一(yī)抗二抗去除液(弱堿,溫和型)(貨号:WS1200)37度15min,快封10分鍾,
一(yī)抗:兔Na-K ATPase 1:5000  RT 60min,羊抗兔IgG-HRP 1:5000 RT 60min,ECL曝光(guāng)1秒(miǎo)




Blue/Clear 非變性凝膠電(diàn)泳試劑盒(RTD6139/RTD6138)

使用該産品發表部分文章列表:

1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b is a global organellar RNA editing factor, required for normal fruit development in tomato plants

Author: Jinyan Li, Keru Wang, Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji, Liqun Ma, Ke Cheng, Oren Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu, Daqi Fu, Yunbo Luo, Hongliang Zhu

Journal: New Phytologist  2023,Volume237, Issue4,February 2023,Pages 1188-1203

Institution China Agricultural University

Paper linkhttps://doi.org/10.1111/nph.18594

 

2. [2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1, functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella

Author: Xinyan Geng,Huijuan Jin, Lan Xia.Binbin Wang,Suren Chen

Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024) 81:118 

Institution: Beijing Normal University

Paper linkhttps://doi.org/10.1007/s00018-023-05081-3

 


 
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