DNA尿素PAGE電(diàn)泳試劑盒

貨号	名稱	規格	保存條件(jiàn)
AC2914-01	40%PAA(29:1)	100 ml	4℃
TB002	10×TBE	500 ml	RT
RU5080	尿素（電(diàn)泳級）	220 g	RT
AP020P	APS（幹粉）	5 ml	RT (配制後-20℃貯存)
TA0761-01	TEMED	0.5 ml	4℃，避光(guāng)
DL080-01	2×TBE尿素上(shàng)樣緩沖液 (尿素變性膠)	1 ml	4℃

● 産品簡介：

DNA尿素 PAGE 電(diàn)泳是研究寡核苷酸電(diàn)泳的重要研究手段。可以檢測2-500堿基的寡核苷酸片段，理論上(shàng)可以分辨出相(xiàng)差一(yī)個(gè)核苷酸的片段。

本公司提供的DNA尿素PAGE電(diàn)泳試劑盒包含凝膠制備及電(diàn)泳所需的全部試劑，用戶隻需自(zì)備制膠器(qì)具和蒸餾水(shuǐ)，即可配制各種濃度的PAGE膠，使用方便。

按照(zhào)每次制備7 ml 10%凝膠（大小(xiǎo)10×8cm，1mm厚度）計算(suàn)，試劑盒可使用至少60次。

● 貯存和運輸：

試劑盒按照(zhào)标簽溫度貯存，有效期一(yī)年(nián)。試劑盒常溫運輸。

● 使用說明：

一(yī)、制備凝膠：

10% APS配制-5 ml：

将0.5 gAPS幹粉溶于5 ml滅菌水(shuǐ)中，徹底溶解後分裝，1 ml/支，-20℃備存，每次取一(yī)管使用。10% APS應盡量減少室溫存放(fàng)時間，以防失效。10%APS在4℃有效期為(wèi)一(yī)周，-20℃有效期12個(gè)月(yuè)。若發現凝膠聚合時間延長(cháng)，應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

1.1．參照(zhào)凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。

1.2．分離膠配制：根據表格一(yī)，将不同體積的成分混合，漩渦攪拌至尿素徹底溶解。

表一(yī) TBE-尿素PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，适用于厚度1.0 mm小(xiǎo)闆膠)

單鏈DNA長(cháng)度	最佳凝膠濃度	尿素（克）	40%PAA （29:1）	10×TBE	補水(shuǐ)到(dào)總體積	10%APS	TEMED
200-1000 nt	5%	2.1克	0.625 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl
50-400 nt	8%	2.1克	1 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl
40-350 nt	10%	2.1克	1.25 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl
30-300 nt	12%	2.1克	1.5 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl
10-150 nt	15%	2.1克	1.875 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl
8-120 nt	20%	2.1克	2.5 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl

1.3在凝膠模具中灌入适量分離膠溶液（對于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃闆頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然後在分離膠溶液上(shàng)輕輕覆蓋一(yī)層1-5 cm的水(shuǐ)層，使凝膠表面保持平整。

1.4靜(jìng)置10-20分鍾，待分離膠和水(shuǐ)層之間出現一(yī)個(gè)清晰的界面後，說明凝膠已聚合。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。

1.5去除覆蓋在分離膠上(shàng)的水(shuǐ)層；按照(zhào)表二将不同體積成分在一(yī)個(gè)小(xiǎo)燒杯中混合；最後加入10%過硫酸铵和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免産生(shēng)氣泡。

表二 TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml，适用于1.0mm厚度膠)

	各組份體積（ml）
凝膠濃度	尿素	40%PAA（29:1）	10×TBE	滅菌水(shuǐ)	10%APS	TEMED
4%	0.84克	0.2 ml	0.2 ml	補水(shuǐ)2 ml	20 μl	2 μl

1.6将濃縮膠溶液加至分離膠的上(shàng)面，直至凝膠溶液到(dào)達前玻璃闆的頂端；将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。

1.7靜(jìng)置30-60分鍾，等待濃縮膠聚合。

二、電(diàn)泳：

2.1. 預電(diàn)泳：拔出梳子，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次，去除殘餘的尿素。電(diàn)泳槽内外加入适量1×TBE緩沖液穩壓200 V預電(diàn)泳30分鍾。

注：試劑盒配套的10×TBE緩沖液僅夠配制凝膠用，1×TBE電(diàn)泳緩沖液請自(zì)己制備，配方如下(xià)：

終濃度	順序	原料	1升	5 升
89 mM	1	Tris堿 [MW121.14]	10.8 克	54克
2 mM	2	EDTA 2Na·2H₂O [MW372.24]	0.744 克	3.72克
89 MM	3	硼酸 [MW61.83]	5.5 克	27.5克
	4	超純水(shuǐ)最後定容至	1 升	5 升
		最後pH在8.2-8.3之間，可以不用調節pH，記錄每批pH

2.2. 取 3-5 μl樣品,加入等體積2×TBE尿素上(shàng)樣緩沖液，70℃處理5 分鍾後立即冰浴，上(shàng)樣。

2.3. 連接電(diàn)源線，打開(kāi)電(diàn)源開(kāi)關，按照(zhào)以下(xià)條件(jiàn)電(diàn)泳。

	恒電(diàn)壓	起始電(diàn)流	結束電(diàn)流	電(diàn)泳時間	适用條件(jiàn)
推薦電(diàn)壓	200V	15-20 mA/闆膠	10-15 mA/闆膠	60+ min	最佳電(diàn)壓，最優的分辨率

2.4. 等待上(shàng)樣緩沖液的溴酚藍指示前沿到(dào)凝膠底部時終止電(diàn)泳，取出凝膠進行後續實驗。

變性膠濃度	溴酚藍	二甲苯菁
5%	35 nt	130 nt
8%	19 nt	75 nt
10%	15 nt	55 nt
15%	10 nt	52 nt

三、染色：

3.1 單鏈DNA可以用單鏈DNA PAGE電(diàn)泳染色試劑盒（貨号：RTS5103），核酸PAGE電(diàn)泳染色試劑盒（貨号：RTS5102）或核酸快速銀(yín)染試劑盒（貨号：RTS5101）進行染色。

● 實驗示例：

1. 使用單鏈DNA PAGE電(diàn)泳染色試劑盒（貨号：RTS5103）染色：

2. 使用核酸PAGE電(diàn)泳染色試劑盒（貨号：RTS5102）染色：

3. 使用RealSafe Red核酸染料（貨号：GR002）染色：

4 使用核酸快速高(gāo)靈敏度染色試劑盒（貨号：RTS5101）染色：

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核酸電(diàn)泳試劑盒

使用RTE4102 DNA尿素PAGE電(diàn)泳試劑盒 産品發表部分文章列表：

1. [2022 IF=9.23] Precision-SELEX aptamer screening for the colorimetric and fluorescent dual-readout aptasensing of AFB in food.

Author: Ying Li, Boyu Jia, Pengyue Song, Nan Long, Linchun Shi, Peng Li, Jiabo Wang，Lidong Zhou, Weijun Kong

Product: RTE4102 DNA尿素PAGE電(diàn)泳試劑盒

Journal: Food Chemistry 436 (2024) 137661

Institution：School of Traditional Chinese Medicine, Capital Medical University

Paper link： https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2023.137661

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