單鏈DNA Marker（15-120 nt）
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貨号
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名稱
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規格
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RTM506
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單鏈DNA Marker（15-120 nt）
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10次
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● 産品組成：
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貨号
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名稱
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規格
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貯存
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RTM506-01
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單鏈DNA Marker（15-120 nt）
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50 μl
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-20℃
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DL080-01
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2×TBE尿素上(shàng)樣緩沖液
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1 ml
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-20℃
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● 産品簡介：
單鏈DNA Marker由6條不同長(cháng)度的單鏈DNA分子混合而成，6條帶的大小(xiǎo)為(wèi)15，40，60，80，100，120 nt，80 nt 濃度為(wèi)0.4 μg/μl，其餘條帶濃度為(wèi)0.2
μg/μl。該Marker适用于跑尿素變性膠，電(diàn)泳後使用單鏈DNA
PAGE電(diàn)泳染色試劑盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE電(diàn)泳染色試劑盒（Cat：RTS5102），核酸快速高(gāo)靈敏度染色試劑盒（Cat：RTS5101）或RealSafe類核酸染料染色均可以得到(dào)清晰的條帶分離效果。
樣品保存在1×TBE尿素上(shàng)樣緩沖液中，上(shàng)樣方便。以每次上(shàng)樣5 μl計算(suàn)，該單鏈DNA
Marker可以使用大約10次。
● 保存條件(jiàn)和運輸：
-20℃貯存，有效期24個(gè)月(yuè)；濕冰運輸。
● 使用方法：
注：以下(xià)使用方法均以8×10cm凝膠 厚1.0mm示例，其他規格凝膠請适當調整。
一(yī). 凝膠制備：
1.1 可以選擇DNA尿素PAGE電(diàn)泳試劑盒（Cat：RTE4102））或按照(zhào)以下(xià)程序制膠：
表一(yī) TBE-尿素PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，适用于厚度1.0 mm小(xiǎo)闆膠)
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單鏈DNA長(cháng)度
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最佳凝膠濃度
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尿素（克）
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40%PAA
（29:1）
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5×TBE
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補水(shuǐ)到(dào)總體積
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.1克
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0.625 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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50-400 nt
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8%
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2.1克
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1 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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30-300 nt
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10%
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2.1克
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1.25 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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10-150 nt
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15%
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2.1克
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1.875 ml
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1 ml
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5 ml
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50 μl
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5 μl
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最後加入10%APS和TEMD後，立即混勻。
1.2在凝膠模具中灌入适量分離膠溶液（對于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃闆頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然後在分離膠溶液上(shàng)輕輕覆蓋一(yī)層1-5 cm的水(shuǐ)層，使凝膠表面保持平整。
1.3靜(jìng)置10-20分鍾，待分離膠和水(shuǐ)層之間出現一(yī)個(gè)清晰的界面後，說明凝膠已聚合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。
1.4去除覆蓋在分離膠上(shàng)的水(shuǐ)層；按照(zhào)表二将不同體積成分在一(yī)個(gè)小(xiǎo)燒杯中混合；最後加入10%過硫酸铵和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免産生(shēng)氣泡。
表二 TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml，适用于1.0mm厚度膠)
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各組份體積（ml）
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凝膠濃度
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尿素
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40%PAA（29:1）
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5×TBE
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滅菌水(shuǐ)
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10%APS
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TEMED
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4%
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0.84克
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0.2 ml
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0.4 ml
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補水(shuǐ)至體積2 ml
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20 μl
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2 μl
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1.5将濃縮膠溶液加至分離膠的上(shàng)面，直至凝膠溶液到(dào)達前玻璃闆的頂端；将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。
1.6靜(jìng)置30-60分鍾，等待濃縮膠聚合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。
二. 樣品制備：
2.1
取适量體積單鏈DNA
Marker樣品，70℃處理5分鍾，冰浴制冷後待上(shàng)樣；待測樣品序與2×TBE尿素上(shàng)樣緩沖液等體積混合後70℃處理5分鍾，冰浴制冷後待上(shàng)樣。
三.電(diàn)泳：
3.1. 預電(diàn)泳（可選）：電(diàn)泳槽内外加入适量1×TBE緩沖液穩壓200 V預電(diàn)泳30分鍾。電(diàn)泳結束後，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次，去除殘餘的尿素。
3.2.上(shàng)樣：根據梳齒确定Marker上(shàng)樣量， 一(yī)般是10齒1mm厚梳子上(shàng)樣5
μl，15齒1mm厚梳子上(shàng)樣3
μl。
3.3. 連接電(diàn)源線，打開(kāi)電(diàn)源開(kāi)關，按照(zhào)以下(xià)條件(jiàn)電(diàn)泳。
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恒電(diàn)壓
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起始電(diàn)流
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結束電(diàn)流
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電(diàn)泳時間
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适用條件(jiàn)
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推薦電(diàn)壓
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200V
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15-20 mA/闆膠
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10-15 mA/闆膠
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60+ min
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最佳電(diàn)壓，最優的分辨率
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3.4. 等待上(shàng)樣緩沖液的溴酚藍指示前沿到(dào)凝膠底部時終止電(diàn)泳，取出凝膠進行後續實驗。
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變性膠濃度
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溴酚藍
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二甲苯菁
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5%
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35 nt
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130 nt
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8%
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19 nt
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75 nt
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10%
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15 nt
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55 nt
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15%
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8 nt
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42 nt
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四．染色：
用單鏈DNA PAGE電(diàn)泳染色試劑盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE電(diàn)泳染色試劑盒（Cat：RTS5102）或核酸快速銀(yín)染試劑盒（Cat：RTS5101）染色均可以得到(dào)清晰的條帶分離效果。
注：如果使用核酸染料染色，RealSafe
Red（貨号：GR002）或RealSafe
All（貨号：GR004）核酸染料結合單鏈核酸效果最佳，強烈建議使用以便獲得最佳效果的膠圖。其餘染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。
● 電(diàn)泳示例：
1. 使用RealSafe Red核酸染料（貨号：GR002）染色：
2. 使用核酸快速高(gāo)靈敏度染色試劑盒（貨号：RTS5101）染色：
