彩虹預染超低(dī)分子量蛋白(bái)質Marker II（3-40 kD）
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight
Protein Marker II（3-40 kD）
●産品編号及規格：
RTD6145-01 10 T（50 μl）
RTD6145-02 50 T（250 μl）
● 儲存條件(jiàn)：
-20℃保存，有效期12個(gè)月(yuè)
● 産品簡介：
彩虹預染超低(dī)分子量蛋白(bái)質Marker II可以直接觀察蛋白(bái)電(diàn)泳及清晰判斷Western Blotting的轉膜效果。本産品由9種多(duō)肽和蛋白(bái)質組成，分子量大小(xiǎo)為(wèi) 3 kD，4.2 kD，6.5 kD，10 kD（綠色），15 kD，20 kD，25 kD，30 kD，40 kD（紅(hóng)色） (注：蛋白(bái)大小(xiǎo)已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預染蛋白(bái)Marker标定過。)。
● 使用說明：
第一(yī)次收到(dào)該産品，常溫融化後，徹底混勻，離心快甩将溶液完全收集到(dào)管底。
一(yī). 制膠：
I 配制分離膠
1．按照(zhào)表一(yī)将不同體積的雙蒸水(shuǐ)、40% PAA（19:1）、凝膠緩沖液和乙二醇加入到(dào)小(xiǎo)燒杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混勻5-10秒(miǎo)，以使溶液充分混勻。
3．在凝膠模具中迅速灌入适量分離膠溶液，然後在分離膠溶液上(shàng)輕輕覆蓋一(yī)層1
cm的無水(shuǐ)乙醇，使凝膠表面保持平整。
4．靜(jìng)置15-30分鍾，待分離膠和乙醇層之間出現一(yī)個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
表一(yī) （一(yī)塊1 mm mini膠用量）
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分離膠
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濃縮膠
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18％T, 5%C /5 ml
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5％T, 3.3%C/2 ml
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40% PAA（19:1）
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2.25 ml
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/
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40% PAA (29:1)
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/
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0.25 ml
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4×凝膠緩沖液
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1.25 ml
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0.5 ml
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乙二醇（電(diàn)泳級）
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1.5 ml
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/
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ddH2O
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/
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1.25ml
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10％APS
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50 μl
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20 μl
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TEMED
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5 μl
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2 μl
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II 配制濃縮膠
去除覆蓋在分離膠上(shàng)的乙醇層，用濾紙(zhǐ)将殘留乙醇吸去。
1．按照(zhào)表一(yī)将不同體積的雙蒸水(shuǐ)、40%PAA（29:1）和凝膠緩沖液加入到(dào)小(xiǎo)燒杯中混合。
2．加入10%過硫酸铵和TEMED，立即混勻5-10秒(miǎo)，以使溶液充分混勻。
3．将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。
4．靜(jìng)置30-60分鍾裝待凝膠聚合
二. 電(diàn)泳：
1. 取Marker樣品，充分混勻後備用。不要加熱處理。
2. 電(diàn)泳前，将10×陽極緩沖液（Cat No：AB080）和10×陰極緩沖液（Cat No：CB010）用蒸餾水(shuǐ)稀釋成1×緩沖液備用。将電(diàn)泳槽的外槽加入1×陽極緩沖液，内槽加入1×陰極緩沖液，輕柔拔出梳子，将Marker或蛋白(bái)樣品（已經過2×Tricine上(shàng)樣緩沖液[Cat No：TP050]處理）加入點樣孔，參考下(xià)表進行電(diàn)泳，至每條帶都清晰可見(jiàn)時停止電(diàn)泳。整個(gè)電(diàn)泳過程大約需要2-3個(gè)小(xiǎo)時。
表二 多(duō)肽電(diàn)泳條件(jiàn)
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恒電(diàn)壓
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150V
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起始電(diàn)流
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60-75mA/闆膠
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結束電(diàn)流
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15-25mA/闆膠
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電(diàn)泳時間
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2.5-3小(xiǎo)時
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三. 染色
根據常規實驗步驟，用配方6和7（表三）進行染色和觀察。如果使用配方6進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的考馬斯亮藍蛋白(bái)膠快速染色液（Cat No：RTD6201），該産品除具有染色快，無毒，靈敏性高(gāo)等特點外，還(hái)能(néng)對小(xiǎo)肽在染色中起到(dào)固定作用，不至于小(xiǎo)肽在染色和脫色中從(cóng)凝膠中脫離，是常規染色液的理想替代品。
注：預染蛋白(bái)Marker由于嵌合了染料，在不同的凝膠系統中遷移率會(huì)有不同，因此隻能(néng)用來粗略估計目的蛋白(bái)的大小(xiǎo)。如要精确确定蛋白(bái)的大小(xiǎo)，請在同一(yī)凝膠系統中用非預染蛋白(bái)Marker來标定預染蛋白(bái)Marker的分子量。
表三 小(xiǎo)分子蛋白(bái)質SDS-PAGE電(diàn)泳試劑配制
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1. 40%PAA（29:1）（配制濃縮膠）
貨号： AC2914
丙稀酰胺 38.67g
甲叉雙丙稀酰胺 1.33g
用ddH2O溶解後定容至100
ml，過濾後使用。
貯存：4℃
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2. 40% PAA（19:1） （配制分離膠）
貨号：AC1914
丙稀酰胺 38 g
甲叉雙丙稀酰胺 2 g
用ddH2O溶解後定容至100
ml，過濾後使用。
貯存：4℃
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3. 4×凝膠緩沖液（配制凝膠用）
貨号：GB010
[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]
Tris堿 36.3 g；ddH2O 80ml
0.4
g SDS或4 ml 10％ SDS
用HCl調pH值至8.45；用ddH2O定容至100
ml
貯存：4℃
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4. 10×陽極緩沖液（下(xià)槽緩沖液）
貨号：AB080
[2
M Tris pH8.9]
Tris堿 121.1g；ddH2O 400ml；用HCl調pH值至8.9；用ddH2O定容至500ml
貯存：4℃
注：使用前稀釋成1×陽極緩沖液使用。
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5. 10×陰極緩沖液（上(shàng)槽緩沖液）
貨号：CB010
[1
M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]
Tris堿 121.14g；Tricine 179.2g；SDS 10 g
用ddH2O溶解，定容至1000
ml(不用調pH)。
貯存：4℃
注：使用前稀釋成1×陰極緩沖液使用
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6. 染色液
貨号：RTD6203
冰醋酸 100 ml
考馬斯亮藍G-250 0.25 g
水(shuǐ) 900 ml
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7. 脫色液
貨号：RTD6204
冰醋酸 100 ml
水(shuǐ) 900 ml
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8. 2×Tricine蛋白(bái)樣品上(shàng)樣緩沖液（10ml）
貨号：TP050
1ml1MTris-HCl pH6.8；2.4
ml 甘油；0.8 g SDS；0.31
g DTT（或者400 μl β-巯基乙醇）；2
mg 考馬斯亮藍G-250；用滅菌水(shuǐ)定容至10ml
混勻分裝-20℃貯存備用
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多(duō)肽電(diàn)泳配套試劑
使用RTD6145 彩虹預染超低(dī)分子量Marker
II（3-40 kD）産品發表部分文章列表：
1. [2022 IF=13.6] Inactivation mechanism of cold plasma combined with 222 nm ultraviolet for
spike protein and its application in disinfecting of SARS-CoV-2
Author: Xiaowei
Sheng, Jin Wang, Luling Zhao, Wenjing Yan, Jing Qian, Zhaobin Wang, Jianhao
Zhang, Vijaya Raghavan
Marker: RTD6145
彩虹預染超低(dī)分子量Marker
II（3-40kD）
Journal: Journal of Hazardous Materials 465 (2024) 133458
Institution: Nanjing
Agricultural University
Paper link： https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2024.133458