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RealPAGE plus彩色凝膠快速制備試劑盒 10%

RealPAGE plus彩色凝膠快速制備試劑盒 10%

産品編号:RTD6132-10

産品規格:10%

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥300



RealPAGE plus彩色凝膠快速制備試劑盒

 RealPAGE plus Colour Gel Fast Preparation Kit

●  貨品規格:

貨号

說明

制膠數量

RTD6132-06

制備6%PAGE

125 0.75mm

901 mm

601.5 mm

RTD6132-08

制備8%PAGE

RTD6132-10

制備10%PAGE

RTD6132-12

制備12%PAGE

RTD6132-15

制備15%PAGE

●  貨品内容:

組份

貨号

名稱

規格

保存

1

RTD6132-UA

上(shàng)層膠溶液A

80 ml

4

2

RTD6132-UB

彩色上(shàng)層膠溶液B

80 ml

4

3

RTD6132-LA06

下(xià)層膠溶液A 6%

250 ml

4

RTD6132-LA08

下(xià)層膠溶液A 8%

250 ml

4

RTD6132-LA10

下(xià)層膠溶液A 10%

250 ml

4

RTD6132-LA12

下(xià)層膠溶液A 12%

250 ml

4

RTD6132-LA15

下(xià)層膠溶液A 15%

250 ml

4

4

RTD6132-LB

下(xià)層膠溶液B

250 ml

4

5

RTD6132-SP

改良型促凝劑

8 ml

4℃,配制後-20℃貯存

說明書

一(yī)份

● 産品簡介:

該産品利用聚丙烯酰胺凝膠電(diàn)泳原理,采用合理設計的預混合配方和配制流程,可在50分鍾内配制得到(dào)高(gāo)質量的聚丙烯酰胺凝膠,用于變性和非變性蛋白(bái)凝膠電(diàn)泳。本産品可以配制常用分離膠濃度6%、8%、10%、12%和15%,可以滿足絕大多(duō)數蛋白(bái)電(diàn)泳需求。

本試劑盒大約可以配制60-125塊常規大小(xiǎo)(8×10cm)PAGE凝膠,具體數量根據凝膠厚度決定:0.75mm厚度凝膠可以配制125塊膠,1mm厚度凝膠可以配制至少90塊膠,1.5mm厚度凝膠可以配制至少60塊膠。

● 運輸和貯存:

本産品常溫運輸;組份按照(zhào)标簽溫度貯存;有效期一(yī)年(nián)。

● 特點:

1. 方便:彩色上(shàng)層膠,方便上(shàng)樣;上(shàng)層膠和下(xià)層膠溶液1:1混合,無需計算(suàn);

2. 安全:不用接觸有毒粉末;不用單獨添加TEMED;

3. 兼容性廣:制膠溶液中不含SDS,可用于非變性電(diàn)泳(Native-PAGE);

● 使用說明:

一(yī)  凝膠制備:

1.1參照(zhào)凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。

1.2 根據下(xià)表參考選擇合适的凝膠濃度

表一(yī)不同濃度的PAGE下(xià)層膠的最佳分離範圍

下(xià)層膠(分離膠)濃度

最佳分離範圍

6%

50-350 kD

8%

35-300 kD

10%

20-150 kD

12%

15-100 kD

15%

10-80 kD










1.3 根據下(xià)表配制凝膠:

表二 凝膠配制表

下(xià)層膠配方

上(shàng)層膠配方

膠厚度

下(xià)層膠溶液B

下(xià)層膠溶液A

改良型促凝劑

膠厚度

彩色上(shàng)層膠溶液B

上(shàng)層膠溶液A

改良型促凝劑

0.75 mm

2 ml

2 ml

40 μl

0.75 mm

0.5 ml

0.5 ml

10 μl

1.0 mm

2.5 ml

2.5 ml

50 μl

1.0 mm

0.75 ml

0.75 ml

15 μl

1.5 mm

4 ml

4 ml

80 μl

1.5 mm

1 ml

1 ml

20 μl

1.3.1 取等體積下(xià)層膠溶液B 和下(xià)層膠溶液A ,各 2.0/2.5/4.0 ml,混勻;

1.3.2混合溶液中加入 40/50/80 μl的改良型促凝劑,輕輕混勻,将混勻後的溶液注入制膠玻璃闆中,使液面和短玻璃闆上(shàng)沿之間的距離比梳齒長(cháng)0.5 cm即可;

注意:此溶液為(wèi)過量,請勿全部注入。

1.3.3 沿玻璃闆緩慢(màn)加入适量滅菌水(shuǐ)或無水(shuǐ)乙醇覆蓋于下(xià)層膠之上(shàng),待下(xià)層膠凝固後,倒去上(shàng)層水(shuǐ)或乙醇;

注意:當水(shuǐ)(乙醇)和膠之間有一(yī)條折射線時,說明膠已凝固;25℃5-10分鍾可以聚合。

1.3.4 取等體積彩色上(shàng)層膠溶液B和上(shàng)層膠溶液A ,各 0.5/0.75/1.0 ml,混勻;

1.3.5向混合溶液中加入 10/15/20 μl 的改良型促凝劑,輕輕混勻,插入梳齒;

1.3.6 待上(shàng)層膠凝固後 (約20-40 min),拔去梳齒即可用于電(diàn)泳。

注:凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時,聚合較快;冬天氣溫低(dī)時,聚合時間會(huì)延長(cháng)。

上(shàng)層膠25℃ 20-25分鍾可以聚合;18℃ 35-40分鍾可以聚合。

  電(diàn)泳:

2.1 SDS-PAGE變性電(diàn)泳:

2.1.1電(diàn)泳緩沖液配制:

将5×Tris-甘氨酸-SDS電(diàn)泳緩沖液幹粉(自(zì)備,組份0.96 M 甘氨酸,0.125 M Tris,0.5% SDS)全部倒入1L燒杯中,加入約900 ml水(shuǐ)徹底溶解,用水(shuǐ)定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液(此溶液不用調節pH值)。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS電(diàn)泳緩沖液。

2.1.2 樣品處理:融化-混合-變性-上(shàng)樣

5×MonoColor蛋白(bái)上(shàng)樣緩沖液常溫數分鍾解凍後輕輕搖勻,以确保溶液混合均勻;将緩沖液與蛋白(bái)樣品按照(zhào)1:4的比例混勻,如8 μl樣品加入2 μl 5×上(shàng)樣緩沖液;将蛋白(bái)樣品置于95℃中加熱5-10分鍾;蛋白(bái)樣品加入凝膠加樣孔内電(diàn)泳。

2.1.3 電(diàn)泳過程;

在電(diàn)泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸-SDS電(diàn)泳緩沖液(讓電(diàn)泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,用1ml吸頭徹底沖洗加樣孔,随後在電(diàn)泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸-SDS電(diàn)泳緩沖液。

表三 SDS-PAGE電(diàn)泳條件(jiàn)

恒電(diàn)壓

起始電(diàn)流(一(yī)闆膠)

結束電(diàn)流(一(yī)闆膠)

電(diàn)泳時間

适用條件(jiàn)

150V

35-40 mA

15-20 mA

55 + min

最佳電(diàn)壓,最優的分辨率

200V

45-55 mA

20-25 mA

45+ min

節省時間

225V

40-50 mA

15-20 mA

35+ min

250V

65-75 mA

20-25 mA

30+ min

300V

70-80 mA

25-35mA

25+ min

最省時間

2.2 非變性電(diàn)泳(Native PAGE):

2.2.1電(diàn)泳緩沖液配制:

将5×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液幹粉(自(zì)備,組份0.96 M 甘氨酸,0.125 M Tris)全部倒入1L燒杯中,加入約900 ml水(shuǐ)徹底溶解,用水(shuǐ)定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液(此溶液不用調節pH值)。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS電(diàn)泳緩沖液。

2.2.2 樣品處理:融化-混合-上(shàng)樣

5×非變性非還(hái)原蛋白(bái)上(shàng)樣緩沖液常溫數分鍾解凍後輕輕搖勻,以确保溶液混合均勻;将緩沖液與蛋白(bái)樣品按照(zhào)1:4的比例混勻,如8 μl樣品加入2 μl 5×上(shàng)樣緩沖液;蛋白(bái)樣品加入凝膠加樣孔内電(diàn)泳。注:非變性電(diàn)泳樣品不能(néng)加熱處理。

2.2.3 電(diàn)泳過程;

在電(diàn)泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液(讓電(diàn)泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,用1ml吸頭徹底沖洗加樣孔,随後在電(diàn)泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液。

 

 

表四 Native PAGE電(diàn)泳條件(jiàn)

 

恒電(diàn)壓

起始電(diàn)流

結束電(diàn)流

電(diàn)泳時間

适用條件(jiàn)

推薦電(diàn)壓

150V

25-35/闆膠

5-10 mA/闆膠

60 + min

最佳電(diàn)壓,最優的分辨率

染色:

1. 将電(diàn)泳後的PAGE膠取下(xià)放(fàng)入塑料容器(qì)中,加入适量FastBlue蛋白(bái)染色液或常規考馬斯亮藍染色液(以剛剛覆蓋過膠面為(wèi)适),條帶1-2分鍾即可見(jiàn)。

2. 搖床常溫搖動10-15分鍾至條帶清晰可見(jiàn)。

3. 加入适量蒸餾水(shuǐ)脫色,期間更換1-2次蒸餾水(shuǐ),搖床常溫搖動10-15分鍾至背景幹淨。

4. 觀察保存結果。


實驗示例:



 
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