超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker IV(3.3-45kD)

	分離膠	濃縮膠
	18％T, 5%C /6.0 ml	5％T, 3.3%C/2 ml
40% PAA（19:1）	2.7 ml	/
40% PAA (29:1)	/	0.25 ml
4×多(duō)肽電(diàn)泳凝膠緩沖液	1.5 ml	0.5 ml
乙二醇（電(diàn)泳級）	1.8 ml	/
ddH₂O	/	1.25 ml
10％APS	50-65 μl	20 μl
TEMED	6 μl	2 μl

注：如非必須，不要使用1.0mm和1.5mm的凝膠，盡量使用厚度0.75mm的凝膠，這樣會(huì)減少電(diàn)泳後染色和脫色的時間。

II 配制濃縮膠

去除覆蓋在分離膠上(shàng)的水(shuǐ)層，用濾紙(zhǐ)将殘留的水(shuǐ)吸去。

1．按照(zhào)表一(yī)将不同體積的雙蒸水(shuǐ)、40%PAA（29:1）和凝膠緩沖液加入到(dào)小(xiǎo)燒杯中混合。

2．加入10%過硫酸铵和TEMED，立即混勻5-10秒(miǎo)，以使溶液充分混勻。

3．将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。

4．靜(jìng)置20-30分鍾裝待凝膠聚合

二. 電(diàn)泳：

1. 取一(yī)管分裝好的Marker樣品，徹底融化，95℃加熱處理5分鍾，充分混勻後備用。

2. 電(diàn)泳前，将10×Tris-Tricine-SDS電(diàn)泳緩沖液（Cat No：CB010）用蒸餾水(shuǐ)稀釋成1×緩沖液備用。将電(diàn)泳槽的内外槽加入1×緩沖液，輕柔拔出梳子，将Marker或蛋白(bái)樣品（樣品已經過2×Tricine上(shàng)樣緩沖液[Cat No：TP050]處理）加入點樣孔，根據表二條件(jiàn)進行電(diàn)泳，至藍色指示前沿至分離膠3/4位置時即可停止電(diàn)泳。整個(gè)電(diàn)泳過程大約需要2-3個(gè)小(xiǎo)時。注：如果電(diàn)泳時間過短，染色時，指示前沿容易遮擋小(xiǎo)于5kd的小(xiǎo)肽。

表二 多(duō)肽電(diàn)泳條件(jiàn)

恒電(diàn)壓	150 V
起始電(diàn)流	45-55 mA
結束電(diàn)流	10-15 mA
電(diàn)泳時間	2-3小(xiǎo)時

三. 染色

根據常規實驗步驟，用配方5和6（表三）進行染色和觀察。如果使用配方5進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的FastBlue蛋白(bái)染色液（Cat No：RTD6202），該産品能(néng)在5分鍾之内完成蛋白(bái)的染色，不至于小(xiǎo)肽在染色和脫色中從(cóng)凝膠中脫離，是常規染色液的理想替代品。

表三 小(xiǎo)分子蛋白(bái)質SDS-PAGE電(diàn)泳試劑配制

1. 40%PAA（29:1）（配制濃縮膠）

Cat No:AC2914

丙稀酰胺 38.67g

甲叉雙丙稀酰胺 1.33g

用ddH₂O溶解後定容至100 ml，過濾後使用。

貯存：4℃避光(guāng)保存

2. 40% PAA（19:1） （配制分離膠）

Cat No:AC1914

丙稀酰胺 38 g

甲叉雙丙稀酰胺 2 g

用ddH₂O溶解後定容至100 ml，過濾後使用。

貯存：4℃避光(guāng)保存

3. 4×多(duō)肽電(diàn)泳凝膠緩沖液（配制凝膠用）

[3MTris; 0.4% SDS; pH8.45]

Cat No:GB010

Tris堿 36.3 g；

ddH2O 80ml

0.4 g SDS或4 ml 10％SDS

用HCl調pH值至8.45；用ddH2O定容至100 ml

貯存：4℃

4. 10×Tris-Tricine-SDS電(diàn)泳緩沖液

[1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3]

Cat No:CB010

Tris堿 121.14g

Tricine 179.2g

SDS10g

用ddH2O溶解，定容至1000ml(不用調pH)。

貯存：4℃

注：使用前稀釋成1×緩沖液使用

5. 染色液

冰醋酸 100 ml

甲醇 450 ml

考馬斯亮藍G-250 0.25 g

水(shuǐ) 450 ml

6. 脫色液

冰醋酸 100ml

水(shuǐ) 900ml

7. 2×Tricine蛋白(bái)樣品上(shàng)樣緩沖液（10ml）

Cat No:TP050

1ml 1MTris-Cl pH6.8

2.4ml 甘油

0.8g SDS

0.31g DTT（或者400μl β-巯基乙醇）

2mg 考馬斯亮藍G-250

用滅菌ddH₂O定容至10ml

混勻分裝-20℃貯存備用

超低(dī)分子量蛋白(bái)MarkerIV附加說明

由于小(xiǎo)肽的氨基酸數目較少，表觀分子量受氨基酸種類影響很大，同一(yī)小(xiǎo)肽在不同的電(diàn)泳系統中表現為(wèi)分子量大小(xiǎo)可能(néng)不一(yī)樣。超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker IV中的倒數第二條帶即為(wèi)這種情況。在使用4×多(duō)肽電(diàn)泳凝膠緩沖液加乙二醇的凝膠系統中（RTD6127附帶說明書系統），表觀分子量為(wèi)10KD（上(shàng)圖左）；而在使用超低(dī)分子量試劑盒系統（RTD6120）電(diàn)泳時，表觀分子量為(wèi)5.5KD（上(shàng)圖右）。

多(duō)肽電(diàn)泳配套試劑

名稱	貨号	規格
超低(dī)分子量蛋白(bái)電(diàn)泳試劑盒	RTD6120	10次
超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker I（3.3-20.1 kD）	RTD6101	10次（100 μl）
超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker III（3.4-100 kD）	RTD6125	10次（50 μl）
彩虹預染超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker（1.2-45 kD）	RTD6110	10次（50 μl）
彩虹預染超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker II（3-40 kD）	RTD6145-01	10次（50 μl）
40% PAA（19:1）	AC1914-01	100ml
40% PAA（29:1）	AC2914-01	100ml
4×多(duō)肽電(diàn)泳凝膠緩沖液	GB010-100ml	100ml
2×Tricine 上(shàng)樣緩沖液（變性，還(hái)原）	TP050	10×1ml
FastBlue蛋白(bái)染色液	RTD6202	500ml
乙二醇（電(diàn)泳級）	EA0582-02	100 ml
10×Tris-Tricine-SDS緩沖液(變性電(diàn)泳，粉末型)	CB010P	500 ml
10×陽極緩沖液（多(duō)肽電(diàn)泳用）	AB080	250 ml
10×陰極緩沖液（多(duō)肽電(diàn)泳用）	CB010	100 ml

使用蛋白(bái)Marker産品發表部分文章列表：

1. [2021 IF=5.5] Garviecin LG34, a novel bacteriocin produced by Lactococcus garvieaeisolated from traditional Chinese fermented cucumber.

Author: Yurong Gao, Dapeng Li, Shan Liu, Liyuan Zhang

Marker: RTD6110，彩虹超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker（1.2-45 kD）

Journal: Food Control 50 (2015) 896e900

Institution：Key Laboratory of Veterinary Medicine of Heilongjiang Bayi Agricultural University

Paper link：http://dx.doi.org/10.1016/j.foodcont.2014.10.040

2. [2021 IF=5.5] Purification and partial characterization of M1-UVs300, a novel bacteriocin produced by isolated from fermented sausage Lactobacillus plantarum.

Author: Yu An, Ying Wang, Xiaoyue Liang, Huaxi Yi, Zhaohang Zuo, Xiaoxi Xu, Dongjie

Zhang, Changqing Yu, Xue Han

Marker: RTD6110，彩虹超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker（1.2-45 kD）

Journal: Food Control Volume 81, November 2017, Pages 211-217

Institution：Key Laboratory of Veterinary Medicine of Heilongjiang Bayi Agricultural University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2017.05.030

3. [2021 IF=5.75] The Verticillium dahliae SnodProt1-Like Protein VdCP1 Contributes to Virulence and Triggers the Plant Immune System.

Author: Yi Zhang, Yuhan Gao, Yingbo Liang, Yijie Dong, Xiufen Yang, Jingjing Yuan and Dewen Qiu

Marker: RTD6110，彩虹超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker（1.2-45 kD）

Journal: Frontiers in Plant Science. Volume 81, November 2017, Pages 211-217

Institution：Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences

Paper link：https://doi.org/10.1093/jxb/ery351

4. [2021 IF=2.99] Purifcation, characterization, and action mechanism of plantaricin DL3, a novel bacteriocin against Pseudomonas aeruginosa produced by Lactobacillus plantarum DL3 from Chinese Suan Tsai.

Author: Xinran Lv, Yang Lin ,Yu Jie, Mengtong Sun, Bolin Zhang,Fengling Bai,Hongfei Zhao,Jianrong Li

Marker: RTD6127，超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker IV（3.3-45 kD）

Journal: European Food Research and Technology. Vol 244, pages 323–331 (2018)

Institution：College of Biological Science and Biotechnology, Beijing Forestry University

Paper link：https://link.springer.com/article/10.1007/s00217-017-2958-3

5. [2021 IF=6.99] Verticillium dahliae Alt a 1-like protein PevD1 targets cotton PR5-like protein and contributes to fungal infection.

Author: Yi Zhang, Yuhan Gao, Yingbo Liang, Yijie Dong, Xiufen Yang, Dewen Qiu

Marker: RTD6110，彩虹超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker （1.2-45 kD）

Journal: Journal of Experimental Botany, Vol 70, Issue 2, 15 January 2019，613-626

Institution：Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences

Paper link：https://doi.org/10.1093/jxb/ery351

6. [2021 IF=11.277] An Alternative Splicing Variant of PtRD26 Delays Leaf Senescence by Regulating Multiple NAC Transcription Factors in Populus.

Author: Hou-Ling Wang,Yi Zhang,Ting Wang, Qi Yang,Yanli Yang,Ze Li, Bosheng Li, Xing Wen, Wenyang Li, Weilun Yin, Xinli Xia, Hongwei Guo, and Zhonghai Li

Marker: RTD6110，彩虹預染超低(dī)分子量蛋白(bái)（1.2-45 kD）

Journal: Plant Cell. Volume 33, Issue 5, May 2021, Pages 1594–1614

Institution：Beijing Advanced Innovation Center for Tree Breeding by Molecular Design, Beijing Forestry University

Paper link：https://doi.org/10.1093/plcell/koab046

7. [2021 IF=2.89] Rapid and sensitive detection ofStaphylococcus aureus and Klebsiella pneumonia based on bacitracin-modified Fe3O4@PDA magnetic beads combined with matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry.

Author: Feng Qin, Shujuan Wang, Mingxia Gao and Xiangmin Zhang

Marker: RTD6110，彩虹預染超低(dī)分子量蛋白(bái)（1.2-45 kD）

Journal: Analytical Methods. 2021,13, 2804-2811

Institution：Department of Chemistry, Fudan University

Paper link：https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2021/ay/d1ay00614b

8. [2021 IF=3.74] Cloning, expression, and function of ferritins in the tick Haemaphysalis flava.

Author: Yu Zhao, Lei Liu, Jin-Bao Liu, Cong-Ying Wu, De-Yong Duan, Tian-Yin Cheng

Marker: RTD6142 高(gāo)分子量非變性電(diàn)泳蛋白(bái)質Marker II（45-669 kD）

Journal: Ticks and Tick-borne Diseases. Volume 13, Issue 2, March 2022, 101892

Institution：College of Veterinary Medicine, Hunan Agricultural University,

Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1877959X21002454

9. [2021 IF=0.886] Purification and Characterization of an Intracellular β-Glucosidase from the Protoplast Fusant of Aspergillus oryzae and Aspergillus niger

Author: F.M. Zhu, B. Du, H.S. Gao, C.J. Liu, and J. Lia

Marker: RTD6109 高(gāo)分子量蛋白(bái)質Marker（43-200 kD）

Journal: Applied Biochemistry and Microbiology, 2010, Vol. 46, No. 6, pp. 626–632

Institution：College of Food Science and Technology, Hebei Normal University of Science and Technology

Paper link：https://link.springer.com/article/10.1134/S0003683810060116

10. [2021 IF=4.374] Effect of Fuzhuan brick-tea addition on the quality and antioxidant activity of skimmed set-type yoghurt.

Author: Dong Liu

Marker: RTD6103 低(dī)分子量蛋白(bái)質Marker II（14.4-116 kD）

Journal: International Journal of Dairy Technology, Vol 71 March 2018 Pages 22-33

Institution：Department of Food Processing Technology, Anqing Vocational & Technical College

Paper link：https://doi.org/10.1111/1471-0307.12395

11. [2021 IF=3.7] Smart delivery of poly-peptide composite for effective cancer therapy

Author: Xin Yuan, Yingzhou Qin, Qingmei Tian, Cuijuan Liu, Xiangzhou Meng, Bo Qie, Fan Gao, Ying Huang, Guanghui Xu, Guang Yang, Yimin Zhu

Marker: Protein Marker

Journal: Biomedical Materials, 2022 Jan 24;17(2)

Institution:School of Nano-Tech and Nano-Bionics, University of Science and Technology of China

Paper link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34996052/

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