Tricine多(duō)肽電(diàn)泳參考文獻

何時使用Tricine-SDS-PAGE檢測小(xiǎo)分子肽？

如果你感興趣的蛋白(bái)小(xiǎo)于20KD，你就(jiù)要使用Tricine-SDS-PAG系統來分離小(xiǎo)肽了。Tricine-SDS-PAGE系統是可以分離1-100KD的蛋白(bái)質。此系統最适合分離低(dī)于30KD的蛋白(bái)質。

相(xiàng)關産品：超低(dī)分子量蛋白(bái)電(diàn)泳試劑盒（貨号：RTD6120）

Tricine-SDS-PAGE與傳統SDS-PAGE的區别：

1 分離膠中更高(gāo)的Tris濃度：終濃度為(wèi)0.75M；普通(tōng)SDS-PAGE為(wèi)0.375M

2 分離膠和濃縮膠中的pH都是8.45

小(xiǎo)肽的電(diàn)泳：

1 關于陰極緩沖液和陽極緩沖液：

Tricine-SDS-PAGE系統不同于常規的SDS-PAGE，使用兩種緩沖液電(diàn)泳。電(diàn)泳槽内槽是1×陰極緩沖液，含有Tricine和SDS。外槽是1×陽極緩沖液，是0.2M Tris。由于電(diàn)泳槽内外槽緩沖液不一(yī)樣，電(diàn)泳前要檢測電(diàn)泳槽是否漏液，如果漏液的話将導緻内外槽緩沖液混合，導緻電(diàn)泳結果不好。如果發現内槽緩沖液漏液，可以将外槽緩沖液加滿到(dào)和内槽緩沖液齊平。

2 關于電(diàn)泳時的電(diàn)壓：

濃縮膠一(yī)般用穩壓80-100V，如果使用新鮮的緩沖液，這時的電(diàn)流應該在20mA左右，如果電(diàn)流太小(xiǎo)，請檢查緩沖液以及電(diàn)泳設備是否有問題。當指示前沿至濃縮膠和分離膠交界時，電(diàn)壓可以調高(gāo)到(dào)120-150V。整個(gè)電(diàn)泳時間約需2-3小(xiǎo)時。

3 關于電(diàn)泳的指示前沿：

由于溴酚藍在Tricine-SDS-PAGE系統中泳動很快，很快就(jiù)跑到(dào)緩沖液中去了。超低(dī)分子量蛋白(bái)Marker和2×Tricine 上(shàng)樣緩沖液中的指示前沿是考馬斯亮藍G-250。電(diàn)泳中隻要指示前沿跑不丢，小(xiǎo)肽就(jiù)不會(huì)跑丢。然而，考馬斯亮藍G-250作為(wèi)指示前沿的缺點是在分離膠中比較彌散。如果電(diàn)泳時間較短，染色時會(huì)遮擋3KD左右的小(xiǎo)肽。

4 小(xiǎo)肽的染色：

由于小(xiǎo)肽還(hái)有較少的氨基酸，染色時結合的染料就(jiù)少，導緻染色靈敏度比較低(dī)。上(shàng)樣時要加大上(shàng)樣量。另外，低(dī)于5KD的小(xiǎo)提容易從(cóng)PAGE膠上(shàng)脫離，染色前最好有個(gè)固定步驟(0.5％戊二醛，30%乙醇)。為(wèi)了更好的染色小(xiǎo)肽，可以選擇FastBlue蛋白(bái)染色液（Cat No：RTD6202），該産品除具有染色快，無毒，靈敏性高(gāo)等特點外，還(hái)能(néng)對小(xiǎo)肽在染色中起到(dào)固定作用，不至于小(xiǎo)肽在染色和脫色中從(cóng)凝膠中脫離，是常規染色液的理想替代品。

 小(xiǎo)肽的轉膜/Western Blot實驗

由于小(xiǎo)肽比較小(xiǎo)，轉膜時要注意小(xiǎo)肽非常容易透過PVDF膜。兩種方法可以解決這一(yī)問題：兩張PVDF膜重疊在一(yī)起；縮短轉膜時間（半幹法轉移，200mA 15-20分鍾就(jiù)可以了）。轉膜使用0.22 μm的PVDF膜。濕轉（轉膜緩沖液加20%甲醇，不加或少加SDS，200mA 30-35分鍾）。

 小(xiǎo)肽電(diàn)泳文獻：

1 Schagger, H. & von Jagow, G. Tricine–sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1–100 kDalton. Anal. Biochem. 166, 368–379 (1987). PDF下(xià)載

最原始小(xiǎo)肽電(diàn)泳的文獻。

2 Schagger, H. Tricine–SDS-PAGE. Nature Protocols. 1,16-23，2006  PDF下(xià)載

87年(nián)的作者Schagger在Nature Protocols 開(kāi)刊文章，寫的精細，值得推薦。

3 兩篇國(guó)内文獻，主要讨論尿素的作用。

多(duō)肽的電(diàn)泳分離 2004

有效分離1kDa小(xiǎo)肽的Tricine-SDS-PAGE方法 2004