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Taq plus DNA聚合酶

Taq plus DNA聚合酶

産品編号:RTS3102-03

産品規格:5×500U

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥900

Taq plus DNA Polymerase

高(gāo)效率、高(gāo)保真DNA聚合酶

目錄号

濃度

包裝

RTS3102-02

5 U/μl

500 U 100μl

RTS3102-03

5 U/μl

5×500 U5×100μl

貯存

  -20℃保存一(yī)年(nián)。

産品簡介

Taq plus DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照(zhào)一(yī)定的比例混合而成,具有擴增效率高(gāo),錯(cuò)配率低(dī)的特點。與Taq DNA聚合酶相(xiàng)比,Taq plus DNA聚合酶具有擴增長(cháng)度長(cháng),保真性好的優點;與pfu DNA聚合酶相(xiàng)比,具有擴增速度快,反應效率高(gāo)的優點。此酶具有比Taq DNA聚合酶約3倍的PCR可信度。該酶的大多(duō)數PCR産物(wù)3’端帶堿基A,可以通(tōng)過TA克隆法進行克隆。

産品組成(RTS3102-02

Taq plus DNA Polymerase(5U/μl)                   100μl

10×Taq plus PCR buffer(含Mg2)                    1ml

活性定義

1單位(U) Taq plus DNA Polymerase活力定義為(wèi)在74℃、30分鍾内,以活性化的大馬哈魚精子DNA作為(wèi)模闆/引物(wù),将10 nmol脫氧核苷酸摻入到(dào)酸不溶物(wù)質所需的酶量。

酶貯存緩沖液

50 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;50 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol

适用範圍

适用于要求保真性和高(gāo)效率的PCR反應,大多(duō)數情況下(xià)可以替代Taq DNA 聚合酶。

使用說明:

1. 按照(zhào)下(xià)表在0.2ml PCR管中制備反應體系:

成分

體積

終濃度

Template

0.1-1μg

as you wish

Primer 110 μM

1μl

200nM

Primer 210 μM

1μl

200nM

10×Taq plus PCR buffer

5μl

dNTP Mixture(10 mM)

1μl

200μM each

Taq plus(5 U/μl)

0.5-1μl

2.5-5U

ddH2O

up to 50μl

-

2. 混勻後,離心快甩将反應液收集到(dào)管底。

3. PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話,補加25μl礦物(wù)油。


4. PCR儀上(shàng)執行以下(xià)程序:

三步法:

步驟

溫度

時間

循環數

初始變性

94

1-5 min

1

變性

94

30 sec

25-40*

退火

Tm-5*

30 sec

延伸

72

1 min/kb

最後延伸

72

5 min

1

*注: PCR 反應條件(jiàn)視模闆、引物(wù)等的結構條件(jiàn)不同而各異。在實際操作中需根據模闆、目的片段的大小(xiǎo)、堿基序列和引物(wù)的長(cháng)短等具體情況,設定最佳的反應條件(jiàn)(溫度、時間等)。


 

      常見(jiàn)問題:

Q1Taq plus DNA polymerase能(néng)擴增多(duō)長(cháng)片段?

A1:對簡單模闆(如λ噬菌體做模闆),可以擴增  kb片段;對複雜(zá)模闆(如基因組DNA),可以擴增  kb片段。

 

Q2Taq plus DNA polymerase保真性怎樣?

A2Taq plus含有3-5校對活性的聚合酶,有校對功能(néng)。保真性為(wèi)普通(tōng)Taq酶的3倍。

 

Q3:使用Taq plus DNA polymerase的擴增産物(wù)是否可以進行TA克隆?

A3:由于使用Taq plus得到(dào)的PCR産物(wù)大多(duō)數帶有A,可以進行TA克隆。

 

Q4Taq plus DNA polymerase可以擴增高(gāo)GC含量片段嗎(ma)?

A6Taq plus可以擴增高(gāo)GC含量片段,建議使用Taq plus配合2×GC buffer使用,而不建議使用10×Taq plus PCR buffer


Taq Plus DNA Polymerase擴增效果

M: DNA Marker III 

1: Rice PEPCase 8.6kb  

2: Rice PEPCase 5.2kb  

3: Rice PEPCase 3.2kb 

4: pCMV-Myc 3kb  

5: pCMV-Myc 2kb




 
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