Taq plus DNA Polymerase
高(gāo)效率、高(gāo)保真DNA聚合酶
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目錄号
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濃度
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包裝
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RTS3102-02
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5 U/μl
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500 U （100μl）
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RTS3102-03
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5 U/μl
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5×500 U（5×100μl）
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● 貯存
-20℃保存一(yī)年(nián)。
● 産品簡介
Taq
plus DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照(zhào)一(yī)定的比例混合而成，具有擴增效率高(gāo)，錯(cuò)配率低(dī)的特點。與Taq DNA聚合酶相(xiàng)比，Taq
plus DNA聚合酶具有擴增長(cháng)度長(cháng)，保真性好的優點；與pfu
DNA聚合酶相(xiàng)比，具有擴增速度快，反應效率高(gāo)的優點。此酶具有比Taq
DNA聚合酶約3倍的PCR可信度。該酶的大多(duō)數PCR産物(wù)3’端帶堿基A，可以通(tōng)過TA克隆法進行克隆。
● 産品組成（RTS3102-02）
Taq plus DNA Polymerase（5U/μl） 100μl
10×Taq plus PCR
buffer（含Mg2＋） 1ml
● 活性定義
1單位(U)
Taq plus DNA Polymerase活力定義為(wèi)在74℃、30分鍾内，以活性化的大馬哈魚精子DNA作為(wèi)模闆/引物(wù)，将10
nmol脫氧核苷酸摻入到(dào)酸不溶物(wù)質所需的酶量。
● 酶貯存緩沖液
50 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1
mMEDTA;1 mMDTT;50 mMKCl ;
Stabilizers; 50% glycerol
● 适用範圍
适用于要求保真性和高(gāo)效率的PCR反應，大多(duō)數情況下(xià)可以替代Taq DNA 聚合酶。
● 使用說明：
1.
按照(zhào)下(xià)表在0.2ml
PCR管中制備反應體系：
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成分
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體積
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終濃度
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Template
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0.1-1μg
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as
you wish
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Primer
1（10
μM）
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1μl
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200nM
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Primer
2（10
μM）
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1μl
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200nM
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10×Taq
plus PCR buffer
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5μl
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1×
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dNTP
Mixture(10 mM)
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1μl
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200μM
each
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Taq
plus(5 U/μl)
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0.5-1μl
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2.5-5U
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ddH2O
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up
to 50μl
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-
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2.
混勻後，離心快甩将反應液收集到(dào)管底。
3.
PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話，補加25μl礦物(wù)油。
4.
PCR儀上(shàng)執行以下(xià)程序：
三步法：
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步驟
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溫度
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時間
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循環數
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初始變性
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94℃
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1-5 min
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1
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變性
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94℃
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30 sec
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25-40*
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退火
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Tm-5℃*
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30 sec
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延伸
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72℃
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1 min/kb
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最後延伸
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72℃
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5 min
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1
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*注： PCR 反應條件(jiàn)視模闆、引物(wù)等的結構條件(jiàn)不同而各異。在實際操作中需根據模闆、目的片段的大小(xiǎo)、堿基序列和引物(wù)的長(cháng)短等具體情況，設定最佳的反應條件(jiàn)（溫度、時間等）。
● 常見(jiàn)問題：
Q1：Taq plus DNA polymerase能(néng)擴增多(duō)長(cháng)片段？
A1：對簡單模闆（如λ噬菌體做模闆），可以擴增 kb片段；對複雜(zá)模闆（如基因組DNA），可以擴增 kb片段。
Q2：Taq plus DNA
polymerase保真性怎樣？
A2：Taq plus含有3’-5’校對活性的聚合酶，有校對功能(néng)。保真性為(wèi)普通(tōng)Taq酶的3倍。
Q3：使用Taq plus DNA
polymerase的擴增産物(wù)是否可以進行TA克隆？
A3：由于使用Taq plus得到(dào)的PCR産物(wù)大多(duō)數帶有A，可以進行TA克隆。
Q4：Taq plus DNA
polymerase可以擴增高(gāo)GC含量片段嗎(ma)？
A6：Taq plus可以擴增高(gāo)GC含量片段，建議使用Taq plus配合2×GC buffer使用，而不建議使用10×Taq plus PCR buffer。
Taq Plus DNA Polymerase擴增效果
M: DNA Marker III
1: Rice PEPCase 8.6kb
2: Rice PEPCase 5.2kb
3: Rice PEPCase 3.2kb
4: pCMV-Myc 3kb
5: pCMV-Myc 2kb
