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高(gāo)純質粒小(xiǎo)提試劑盒

高(gāo)純質粒小(xiǎo)提試劑盒

産品編号:RTP2101-03

産品規格:200次

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥460

高(gāo)純質粒小(xiǎo)提試劑盒目錄号:RTP2101


試劑盒内容及保存:

試劑盒組成

RTP2101-02 100次)

RTP2101-03 200次)

貯存

RNase A

300 μl

600 μl

-20

Lysis Dye

600μl

2×600μl

室溫

溶液P1

30 ml

60 ml

室溫 (加入RNase A2-8保存)

溶液P2

30 ml

60 ml

室溫

溶液P3

40 ml

80 ml

室溫

去蛋白(bái)液PD

60 ml

120 ml

室溫

漂洗液PW

25 ml

2×25 ml

室溫

洗脫緩沖液EB

15 ml

15 ml

室溫

質粒吸附柱CP

100個(gè)

2×100個(gè)

室溫

收集管(2 ml

100個(gè)

2×100個(gè)

室溫

說明書

1

1

 

 


儲存條件(jiàn)和效期:

本試劑盒在室溫(25℃左右)幹燥條件(jiàn)下(xià),可保存1年(nián);更長(cháng)時間的保存可置于2–8℃2–8℃保存條件(jiàn)下(xià),若溶液産生(shēng)沉澱,應在使用前置于37℃下(xià)溶解沉澱至溶液澄清後再使用。單獨包裝的RNase A -20℃可穩定保存1年(nián)以上(shàng)。加入RNase A後的溶液P1應置于2–8℃保存,可穩定保存半年(nián)。

 

産品簡介及使用說明:

本試劑盒采用經典的堿裂解法裂解細菌,再通(tōng)過離心吸附柱在高(gāo)鹽狀态下(xià)特異性地結合DNA的特性,可以從(cóng)15ml大腸杆菌LB培養液中快速提取320μg純淨的高(gāo)拷貝質粒DNA。提取的質粒可适用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等實驗。然而,對質粒純度要求更高(gāo)的轉染實驗(要求無内毒素),此試劑盒不能(néng)達到(dào)要求。另外,盡管該試劑盒可以抽提較大的質粒(>10kb),但我們不推薦使用。如果一(yī)定要使用,請參考以下(xià)方法:加大菌體使用量(使用5–10 ml過夜培養物(wù)),同時按照(zhào)比例增加P1P2P3的用量;洗脫緩沖液應在70℃預熱,在吸附和洗脫時可以适當的延長(cháng)時間,以增加提取效率,其它步驟相(xiàng)同。

 

産品特點:

1使用了Lysis Dye,菌體裂解是否完全一(yī)目了然。由于判斷菌體裂解和中和是否徹底更主要取決于操作者的經驗,所以我們增加了Lysis Dye(一(yī)種能(néng)使裂解/中和體系變換顔色的試劑)來幫助觀察裂解/中和的程度。加入P1後,Lysis Dye使菌液變為(wèi)渾濁的紅(hóng)色;加入P2後,Lysis Dye立即使溶液變為(wèi)澄清的紅(hóng)色,裂解是否完全隻要觀察紅(hóng)色溶液是否澄清,如果紅(hóng)色非常均一(yī),表明裂解充分;在完全裂解的體系中加入P3混勻後,體系立即變為(wèi)黃色,任何紅(hóng)色的殘留表明沒有完全混勻或者中和不徹底。

2 增加了去蛋白(bái)液PD,能(néng)更加徹底地去除蛋白(bái)污染,得到(dào)純度更高(gāo)的質粒。

準備工(gōng)作:

1 将試劑盒附帶的RNase A全部加入到(dào)溶液P1中(如15ml P1中加入150μl RNase A),混勻後4貯存。

2 按照(zhào)标簽所示在漂洗液PW中加入無水(shuǐ)乙醇,混勻後蓋緊瓶蓋後室溫貯存備用。

3 每次使用前請檢查溶液P2,溶液P3和去蛋白(bái)液PD是否有沉澱生(shēng)成,如果出現沉澱,37溫浴至沉澱溶解後再使用。

 

使用Lysis Dye的标準操作步驟:

如非指出,所有離心步驟均為(wèi)使用台式離心機(jī)在室溫下(xià)離心。

1.   1–5 ml過夜培養的菌液加入離心管中,10,000g 離心1分鍾,盡量吸除上(shàng)清。

:菌液較多(duō)時可以通(tōng)過幾次離心将菌體沉澱收集到(dào)一(yī)個(gè)離心管中。

2.   向菌體沉澱的離心管中加入250 μl溶液P1請先檢查是否已加入RNaseA)和5μl Lysis Dye,使用移液器(qì)或渦旋振蕩器(qì)徹底懸浮細菌細胞沉澱,此時溶液為(wèi)渾濁的紅(hóng)色。


注:如果有未徹底混勻的菌塊,會(huì)影響裂解,導緻提取量和純度偏低(dī)。

3.   加入250 μl溶液P2,溫和地上(shàng)下(xià)翻轉6–8次使菌體充分裂解,此時溶液變為(wèi)澄清的紅(hóng)色。


溫和地混合,不要劇烈震蕩,以免污染基因組DNA;所用時間絕對不應超過5分鍾 ,以免質粒受到(dào)破壞;紅(hóng)色溶液應該透明均一(yī),如有渾濁紅(hóng)色顆粒,表明裂解不充分,會(huì)大大降低(dī)質粒提取效率。

4.   加入350 μl溶液P3,立即溫和地上(shàng)下(xià)翻轉,充分混勻,混勻充分的标志(zhì)是溶液完全呈透明的黃色,如有可見(jiàn)紅(hóng)色,說明混勻不徹底。10,000g 離心10分鍾。

注:P3加入後應立即混合,避免産生(shēng)局部沉澱。


左側未完全混勻,有紅(hóng)色;右側完全混勻,呈均勻黃色

5.  小(xiǎo)心地将上(shàng)清轉移到(dào)吸附柱CP中(吸附柱放(fàng)入收集管中)10,000g離心30–60秒(miǎo),倒掉收集管中的廢液,将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。

6.向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白(bái)液PD10,000g離心30秒(miǎo),倒掉收集管中的廢液,将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。

7.  向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW請先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇),10,000g 離心30–60秒(miǎo),倒掉收集管中的廢液,将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。

8. 向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW10,000g 離心30–60秒(miǎo),倒掉收集管中的廢液。

9.  将吸附柱CP置于重新放(fàng)回收集管中,10,000g 離心2分鍾。

:此步驟目的是将吸附柱中殘餘的漂洗液去除,絕對不可省略,因為(wèi)漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響後續實驗(酶切,PCR等)。

10. 将吸附柱CP置于一(yī)個(gè)幹淨的1.5ml離心管中,向吸附膜的中央部位懸空滴加50–100 μl洗脫緩沖液EB,室溫放(fàng)置2分鍾,10,000g 離心2分鍾将質粒溶液收集到(dào)離心管中,-20保存。

注:● 為(wèi)了增加質粒的回收效率,可将得到(dào)的洗脫液重新加入離心吸附柱中,再次離心收集。

洗脫緩沖液體積不應少于50 μl,體積過小(xiǎo)影響回收效率。

洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水(shuǐ)做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5範圍内,pH值低(dī)于7.0會(huì)降低(dī)

洗脫效率。

不使用Lysis Dye的标準操作步驟:

如非指出,所有離心步驟均為(wèi)使用台式離心機(jī)在室溫下(xià)離心。

1.   1–5 ml過夜培養的菌液加入離心管中,10,000 g離心1分鍾,盡量吸除上(shàng)清。

菌液較多(duō)時可以通(tōng)過幾次離心将菌體沉澱收集到(dào)一(yī)個(gè)離心管中。

2.   向菌體沉澱的離心管中加入250 μl溶液P1請先檢查是否已加入RNaseA),使用移液器(qì)或渦旋振蕩器(qì)徹底懸浮細菌細胞沉澱。

注:如果有未徹底混勻的菌塊,會(huì)影響裂解,導緻提取量和純度偏低(dī)。

3.  加入250 μl溶液P2,溫和地上(shàng)下(xià)翻轉6–8次使菌體充分裂解。

注:溫和地混合,不要劇烈震蕩,以免污染基因組DNA所用時間絕對不應超過5分鍾,以免質粒受到(dào)破壞。

4.   加入350 μl溶液P3,立即溫和地上(shàng)下(xià)翻轉6–8次,充分混勻,此時會(huì)出現白(bái)色絮狀沉澱。10,000g 離心10分鍾。

注:P3加入後應立即混合,避免産生(shēng)局部沉澱。如果上(shàng)清中還(hái)有微小(xiǎo)白(bái)色沉澱,可再次離心後取上(shàng)清。

5.  小(xiǎo)心地将上(shàng)清轉移到(dào)吸附柱CP中(吸附柱放(fàng)入收集管中)10,000g 離心30–60秒(miǎo),倒掉收集管中的廢液,将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。

6.向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白(bái)液PD10,000g離心30秒(miǎo),倒掉收集管中的廢液,将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。

7.   向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW請先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇),10,000g 離心30–60秒(miǎo),倒掉收集管中的廢液,将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。

7      向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW10,000g 離心30–60秒(miǎo),倒掉收集管中的廢液。

8.  将吸附柱CP置于收集管中,10,000g 離心2分鍾。

:此步驟目的是将吸附柱中殘餘的漂洗液去除,絕對不可省略,因為(wèi)漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響後續實驗(酶切,PCR等)。

9.   将吸附柱CP置于一(yī)個(gè)幹淨的1.5ml離心管中,向吸附膜的中央部位懸空滴加50–100 μl洗脫緩沖液EB,室溫放(fàng)置2分鍾,10,000g離心2分鍾将質粒溶液收集到(dào)離心管中,-20保存。

注:● 為(wèi)了增加質粒的回收效率,可将得到(dào)的洗脫液重新加入離心吸附柱中,再次離心收集。

洗脫緩沖液體積不應少于50 μl,體積過小(xiǎo)影響回收效率。

洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水(shuǐ)做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5範圍内,pH值低(dī)于7.0會(huì)降低(dī)洗脫效率。

質粒提取試劑盒 RTP2101/RTP2102發表文章

1.  A weird DNA band in PCR and its cause.

Author: Chang Shenghe, Sun Wei, Zhou Zhaoxi, Li Jingyang, Dai Minjie, Shu Haiyan

Product: RTP2102 普通(tōng)質粒小(xiǎo)提試劑盒

Journal: Journal of Plant Science & Molecular Breeding  Volume 5 Article 2 2016

InstitutionHaikou experimental station, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences

Paper linkhttps://doi.org/10.7243/2050-2389-5-2

 

2. [2017 IF=4.076] Application of Real-Time Quantitative PCR to Detect Mink Circovirus in Naturally and Experimentally Infected Minks.

Author: Xingyang Cui, Yunjia Shi, Lili Zhao, Shanshan Gu, Chengwei Wei, Yan Yang,Shanshan Wen, Hongyan Chen and Junwei Ge

Product: RTP2102 普通(tōng)質粒小(xiǎo)提試劑盒

Journal: Fronties in Microbiology May 2018 | Volume 9 | Article 937

InstitutionCollege of Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University

Paper linkhttps://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29867846

 

3. [2018 IF=8.063] ATF4 destabilizes RET through nonclassical GRP78 inhibition to enhance chemosensitivity to bortezomib in human osteosarcoma

Author: Jie Luo, Yuanzheng Xia, Yong Yin, Jun Luo, Mingming Liu, Hao Zhang, Chao Zhang, Yucheng Zhao, Lei Yang, and Lingyi Kong

Product: RTP2101 高(gāo)純質粒小(xiǎo)提試劑盒

Journal: Theranostics 2019, Vol. 9, Issue 21

InstitutionSchool of Traditional Chinese Pharmacy, China Pharmaceutical University

Paper linkhttps://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31534554

 

4. [2020 IF=1.336] Isopentenyl Diphosphate Isomerase (IPI) Gene Silencing Negatively Afects Patchouli Alcohol Biosynthesis in Pogostemon cablin

Author: Wuping Yan,Yuzhang Yang,Yougen Wu,Jing Yu,Junfeng Zhang, Dongmei Yang, Zeeshan Ul Haq Muhammad

Product: RTP2102 普通(tōng)質粒小(xiǎo)提試劑盒

Journal: Plant Molecular Biology Reporter Published 27 January 2021

InstitutionCollege of Horticulture, Hainan University

Paper linkhttps://link.springer.com/article/10.1007/s11105-020-01269-0

 

5. [2022 IF=2] Genomic characterization and phylogenetic analysis of Aleutian mink disease virus identified in a sudden death mink case

Author: Xingyang Cui, Yan Yang, Fang Wang, Jilong Luo, Ping Zhang, Hongyan Chen, Lili Zhao, Junwei Ge

Product: RTP2102 普通(tōng)質粒小(xiǎo)提試劑盒

Journal: Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. Vo101, October 2023, 102052

InstitutionCollege of Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University

Paper linkhttps://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0147957123001108

 


 
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