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2×CTAB提取緩沖液

2×CTAB提取緩沖液

産品編号:RTG2405-200ml

産品規格:200ml

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥150

2×CTAB提取緩沖液

● 産品編号及規格:                                               

貨号

名稱

規格

貯存

RTG2405-200ml

2×CTAB提取緩沖液

200 ml

RT

還(hái)原劑

1 ml

RT

RTG2405-500ml

2×CTAB提取緩沖液

500 ml

RT

還(hái)原劑

1 ml

RT

● 産品介紹:

    CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一(yī)種陽離子去污劑,具有從(cóng)低(dī)離子強度溶液中沉澱核酸與酸性多(duō)聚糖的特性。在高(gāo)離子強度的溶液中(>0.7 M NaCl) CTAB與蛋白(bái)質和多(duō)聚糖形成複合物(wù)而不沉澱核酸。通(tōng)過有機(jī)溶劑抽提,去除蛋白(bái)、多(duō)糖、酚類等雜(zá)質後加入醇(乙醇或異丙醇)沉澱即可使核酸分離出來。

    2×CTAB提取緩沖液成分:2%(w/v,55 mM)CTAB,100 mM Tris (pH 8.0),20 mM EDTA,1.4 MNaCl,,還(hái)原劑(随用随加) 。

● 儲存及運輸:

   常溫貯存一(yī)年(nián);常溫運輸。

● 實驗操作步驟:

一(yī) DNA提取:

   1. 2×即用型CTAB提取液配制:

按照(zhào)終濃度0.2% (v/v)加入還(hái)原劑,如1 ml 2×CTAB提取緩沖液中加入2 μl還(hái)原劑。2×即用型CTAB提取液建議現用現配。

2. 材料研磨:

取0.2-0.5新鮮植物(wù)材料,于液氮中研磨成粉末。

3. 樣品裂解:

按照(zhào)每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取緩沖液的比例将粉末轉入1.5 ml離心管中,立即加入65℃預熱的2×即用型CTAB提取緩沖液,65水(shuǐ)浴30分鍾,間歇混勻。

注:提取緩沖液使用量不要超過0.7 ml,否則後續純化不能(néng)在一(yī)個(gè)離心管内完成;CTAB溶液在低(dī)于15℃時會(huì)形成沉澱析出,因此,在将其加入冰冷的植物(wù)材料之前必須預熱,且離心時溫度不要低(dī)于15℃。

4. 離心去雜(zá)質:

14000 g 常溫離心5分鍾,轉移上(shàng)清至新的1.5 ml離心管中。

5. 去除RNA:

上(shàng)清中加入1/100上(shàng)清體積的RNaseA溶液(10 mg/ml)(貨号:RN001),如500 μl上(shàng)清中加如5 μl RNaseA溶液,37℃處理20分鍾。

6. 第一(yī)次抽提純化:

6.1 步驟5溶液中加入等體積的Tris酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),輕緩颠倒離心管混勻8-10次,常溫14000 g 離心10分鍾,保留上(shàng)清。

6.2. 重複抽提一(yī)次。

7. 第二次純化:

 

上(shàng)清中加入等體積氯仿:異戊醇(24:1),颠倒離心管混勻8-10次,常溫14000 g離心10分鍾,保留上(shàng)層水(shuǐ)相(xiàng)。

8. 沉澱DNA:

8.1 将上(shàng)層水(shuǐ)相(xiàng)轉入新的1.5 ml離心管中,加入0.6倍體積的冰冷異丙醇,輕柔混勻,-20℃靜(jìng)

置30分鍾;

8.2 14000 g4℃離心10分鍾。

9. 漂洗DNA:

9.1 去上(shàng)清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉澱,414000 g 3分鍾,吸棄乙醇。

9.2 4 14000 g 1分鍾,用移液器(qì)吸盡殘餘乙醇,超淨台吹幹沉澱。

注:沉澱不能(néng)徹底幹燥,否則不好溶解。

10. 貯存DNA:

加入50-100 μl的超純水(shuǐ)或TE緩沖液溶解DNA,-20保存備用。

RNA提取:

注:以下(xià)程序請注意所有試劑都要保證RNase-free

1. 2×即用型CTAB提取液(RNase-free,現用現配)配制:

      2×CTAB提取緩沖液中按照(zhào)1/1000體積加入DEPC,如100 ml中加入100 μl DEPC,混勻後過夜處理,高(gāo)溫高(gāo)壓,即為(wèi)2×即用型CTAB提取緩沖液(RNase-free)。按照(zhào)終濃度1 % (v/v)加入還(hái)原劑,如1 ml 2×CTAB提取緩沖液(RNase-free)中加入10 μl還(hái)原劑。2×即用型CTAB提取液建議現用現配。

2. 材料研磨:

取0.2-0.5新鮮植物(wù)材料,于液氮中研磨成粉末。

3. 樣品裂解:

按照(zhào)每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取緩沖液的比例将粉末轉入1.5 ml離心管中,立即加入65℃預熱的2×即用型CTAB提取緩沖液,65水(shuǐ)浴30分鍾,間歇混勻。

注:提取緩沖液使用量不要超過0.7 ml,否則後續純化不能(néng)在一(yī)個(gè)離心管内完成;CTAB溶液在低(dī)于15℃時會(huì)形成沉澱析出,因此,在将其加入冰冷的植物(wù)材料之前必須預熱,且離心時溫度不要低(dī)于15℃。

4. 離心去雜(zá)質:

14000 g 常溫離心5分鍾,轉移上(shàng)清至新的1.5 ml離心管中。

5. 第一(yī)次純化:

上(shàng)清中加入等體積的水(shuǐ)酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),輕緩颠倒離心管混勻8-10次,常溫14000 g 離心10分鍾。

6. 第二次純化:

将上(shàng)清液轉入另一(yī)1.5 ml離心管中,加入等體積氯仿:異戊醇(24:1),颠倒離心管混勻8-10次,常溫14000 g離心10分鍾。

7. 沉澱RNA:

将上(shàng)層水(shuǐ)相(xiàng)轉入新的1.5 ml離心管中,加入1/2體積7.5 M LiCl(RNase-free)(貨号:LC1030),輕柔混勻,-20℃ 靜(jìng)置30分鍾;14000 g4℃離心10分鍾。

9. 漂洗RNA:

9.1 去上(shàng)清液, 沉澱中加入1ml 70%乙醇(RNase-free),吹打漂洗沉澱,14000 g4℃3分鍾,吸棄乙醇。

9.2 14000 g4℃1分鍾,用移液器(qì)吸盡殘餘乙醇,超淨台吹幹沉澱。

注:RNA沉澱不能(néng)過分幹燥,否則不好溶解。

10. 貯存RNA:

加入50-100 μl的RNase-free水(shuǐ)溶解RNA,-80保存備用。

使用該産品發表部分文章列表:

1. [IF=4.35] Combined Effect of High-Pressure Processing with Spice Extracts on Quality of Low-Salt Sausage during Refrigerated Storage.

Author:Qing Xiao, Mei Xu, Baocai Xu, Conggui Chen, Jieying Deng and Peijun Li

Journal: Foods. 2021, 10, 2610.

InstitutionHefei University of Technology

Paper linkhttps://www.mdpi.com/2304-8158/10/11/2610

2. [IF=3.579] Effect of Lactobacillus plantarum andStaphylococcus xylosus on flavour development and bacterial communities in Chinese dry fermented sausages.

Author: YaqingXiao,PeijunLi

Journal: Food Research International. 2020.

InstitutionHefei University of Technology

Paper linkhttps://doi.org/10.1016/j.foodres.2020.109247



 
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