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動物(wù)/細胞基因組DNA提取試劑盒

動物(wù)/細胞基因組DNA提取試劑盒

産品編号:RTG2402-02

産品規格:100次

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥720

動物(wù)/細胞基因組DNA提取試劑盒

貨号

名稱

規格

RTG2402-01

動物(wù)/細胞基因組DNA提取試劑盒

50

RTG2402-02

動物(wù)/細胞基因組DNA提取試劑盒

100

試劑盒内容及保存:

試劑盒組成

RTG2402-01

50次)

RTG2402-02

100次)

貯存方式

緩沖液GA

15 ml

30 ml

室溫

緩沖液GB

15 ml

30 ml

室溫

去蛋白(bái)液GD(濃縮液)

18 ml

36 ml

室溫

漂洗液PW濃縮液)

25 ml

25ml

室溫

洗脫緩沖液EB

15 ml

15 ml

室溫

蛋白(bái)酶K20 mg/ml

1ml

2×1ml

-20

RNase A10 mg/ml

0.5 ml

1 ml

-20

吸附柱CG

50個(gè)

100個(gè)

室溫

收集管(2 ml

50個(gè)

100個(gè)

室溫

說明書

1

1

 

儲存條件(jiàn)和效期:

本試劑盒在室溫(25℃左右)幹燥條件(jiàn)下(xià),可保存1年(nián);更長(cháng)時間的保存可置于2–8℃。2–8℃保存條件(jiàn)下(xià),若溶液産生(shēng)沉澱,應在使用前置于37℃下(xià)溶解沉澱至溶液澄清後再使用。單獨包裝的蛋白(bái)酶K和RNaseA收到(dào)後最好按照(zhào)需要分裝成小(xiǎo)管,-20℃保存。

産品簡介:

本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統,能(néng)提取多(duō)種細胞/組織中的基因組DNA。離心吸附柱可以高(gāo)效、專一(yī)吸附DNA,可最大限度去除雜(zá)質蛋白(bái)及細胞中其他有機(jī)化合物(wù)。提取的基因組DNA片段大,純度高(gāo),質量穩定可靠。

使用本試劑盒回收的DNA可适用于各種常規操作,包括酶切、PCR、文庫構建、Southern雜(zá)交等實驗。

提取得率:

材料

提取量

DNA得量

動物(wù)細胞培養液

106–107 cells

5–30 μg

動物(wù)組織

30 mg

10–30 μg

準備工(gōng)作:

1. 準備55℃和70℃水(shuǐ)浴;無水(shuǐ)乙醇;1.5ml滅菌離心管。

2. 按照(zhào)标簽所示在去蛋白(bái)液GD和漂洗液PW中加入無水(shuǐ)乙醇,混勻後蓋緊瓶蓋後室溫貯存備用。

3. 每次使用前請檢查緩沖液GA,緩沖液GB和去蛋白(bái)液GD是否有沉澱生(shēng)成,如果出現沉澱,37℃溫浴至沉澱溶解後再使用。

操作步驟:

如非指出,所有離心步驟均為(wèi)使用台式離心機(jī)在室溫下(xià)離心。

1. 處理材料:

a. 培養細胞:貼壁培養的細胞應先處理為(wèi)細胞懸液(如用PBS緩沖液或類似緩沖液),10,000 g離心1分鍾,倒盡上(shàng)清,加入200 μl緩沖液GA,振蕩至徹底懸浮。

b. 組織:取約30mg動物(wù)組織(脾組織用量應少于10 mg)加入到(dào)事(shì)先盛有200μl 緩沖液GA的1.5ml離心管中,用研磨杵徹底将組織研碎。

2. 加入20 μl蛋白(bái)酶K (20 mg/ml)溶液。

a. 提取細胞基因組時,加入蛋白(bái)酶K混勻後,55℃放(fàng)置5-10分鍾。

b. 提取組織基因組時,加入蛋白(bái)酶K混勻後,在55℃放(fàng)置,直至組織溶解。

:不同組織裂解時間不同,通(tōng)常需1-3小(xiǎo)時即可完成(鼠尾需要消化過夜),期間間歇颠倒混勻樣品。

3. 加入10 μl RNaseA(10 mg/ml)溶液,混勻後室溫放(fàng)置2分鍾。

4. 加入220 μl緩沖液GB,充分颠倒混勻,70℃放(fàng)置10分鍾,溶液應變清亮,簡短離心以去除管蓋内壁的水(shuǐ)珠。

注:加入緩沖液GB時可能(néng)會(huì)産生(shēng)白(bái)色沉澱,一(yī)般70℃放(fàng)置一(yī)段時間後會(huì)消失。如溶液未變清亮,說明細胞裂解不徹底,會(huì)影響DNA的純度和得率,而且可能(néng)導緻步驟6中離心柱堵塞。

5.加入220 μl 無水(shuǐ)乙醇,颠倒混勻,簡短離心以去除管蓋内壁的水(shuǐ)珠。

注:加入乙醇後會(huì)産生(shēng)絮狀沉澱,可用槍頭反複抽打1-2次将沉澱弄碎後再上(shàng)柱。如果絮狀物(wù)未做處理,容易導緻步驟6中離心柱的堵塞。

6.将上(shàng)一(yī)步所得溶液和絮狀沉澱都加入一(yī)個(gè)吸附柱CG中(吸附柱放(fàng)入收集管中),11,000g離心2分鍾,倒掉廢液,吸附柱CG放(fàng)回收集管中。

:如果出現吸附柱堵塞現象,可将離心時間延長(cháng)到(dào)5分鍾。

7.向吸附柱CG中加入500 μl去蛋白(bái)液GD(使用前請先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇),11,000g離心1分鍾,倒掉廢液,吸附柱CG放(fàng)入收集管中。

8.向吸附柱CG中加入700 μl 漂洗液PW(使用前請先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇),11,000g離心1分鍾,倒掉廢液,吸附柱CG放(fàng)入收集管中。

9.向吸附柱CG中加入500 μl 漂洗液PW(使用前請先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇),11,000g離心1分鍾,倒掉廢液。

10.将吸附柱CG放(fàng)回廢液收集管中,11,000g離心2分鍾。

:此步驟非常重要,目的是将吸附柱中殘餘的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響後續的酶反應(酶切、PCR等)實驗。

11.将吸附柱CG轉入一(yī)個(gè)幹淨的離心管中,向吸附膜的中間部位懸空滴加100 μl經70℃水(shuǐ)浴預熱的洗脫緩沖液EB,室溫放(fàng)置2分鍾,11,000g離心2分鍾。

1. 洗脫緩沖液體積最好不少于100 μl,體積過小(xiǎo)影響回收效率。

2. 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水(shuǐ)做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5範圍内,pH值低(dī)于7.0會(huì)降低(dī)洗脫效率。

12. DNA産物(wù)-20℃保存。

RTG2402 動物(wù)/細胞基因組DNA提取試劑盒産品發表文章

1. [2017 IF=3.974] In vitro and in vivo toxic e?ects and in?ammatory responses induced by carboxylated black carbon-lead complex exposure.

Author: Shuanglin Jiang,, Mengting Shang,Kui Mu,Nan Jiang,Haiyan Wen,Rong Wang,Hai Wu,Wenyong Li

Product: RTG2402 動物(wù)/細胞基因組DNA提取試劑盒

Journal: Ecotoxicology and Environmental Safety 165 (2018) 484–494

InstitutionKey Laboratory of Embryo Development and Reproductive Regulation of Anhui Province, Fuyang Normal University

Paper linkhttp://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0147651318309011


 
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