動物(wù)/細胞基因組DNA提取試劑盒

● 試劑盒内容及保存：

● 儲存條件(jiàn)和效期：

本試劑盒在室溫（25℃左右）幹燥條件(jiàn)下(xià)，可保存1年(nián)；更長(cháng)時間的保存可置于2–8℃。2–8℃保存條件(jiàn)下(xià)，若溶液産生(shēng)沉澱，應在使用前置于37℃下(xià)溶解沉澱至溶液澄清後再使用。單獨包裝的蛋白(bái)酶K和RNaseA收到(dào)後最好按照(zhào)需要分裝成小(xiǎo)管，-20℃保存。

● 産品簡介：

本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統，能(néng)提取多(duō)種細胞/組織中的基因組DNA。離心吸附柱可以高(gāo)效、專一(yī)吸附DNA，可最大限度去除雜(zá)質蛋白(bái)及細胞中其他有機(jī)化合物(wù)。提取的基因組DNA片段大，純度高(gāo)，質量穩定可靠。

使用本試劑盒回收的DNA可适用于各種常規操作，包括酶切、PCR、文庫構建、Southern雜(zá)交等實驗。

● 提取得率：

● 準備工(gōng)作：

1. 準備55℃和70℃水(shuǐ)浴；無水(shuǐ)乙醇；1.5ml滅菌離心管。

2. 按照(zhào)标簽所示在去蛋白(bái)液GD和漂洗液PW中加入無水(shuǐ)乙醇，混勻後蓋緊瓶蓋後室溫貯存備用。

3. 每次使用前請檢查緩沖液GA，緩沖液GB和去蛋白(bái)液GD是否有沉澱生(shēng)成，如果出現沉澱，37℃溫浴至沉澱溶解後再使用。

● 操作步驟：

如非指出，所有離心步驟均為(wèi)使用台式離心機(jī)在室溫下(xià)離心。

1. 處理材料：

a. 培養細胞：貼壁培養的細胞應先處理為(wèi)細胞懸液（如用PBS緩沖液或類似緩沖液），10,000 g離心1分鍾，倒盡上(shàng)清，加入200 μl緩沖液GA，振蕩至徹底懸浮。

b. 組織：取約30mg動物(wù)組織（脾組織用量應少于10 mg）加入到(dào)事(shì)先盛有200μl 緩沖液GA的1.5ml離心管中，用研磨杵徹底将組織研碎。

2. 加入20 μl蛋白(bái)酶K (20 mg/ml)溶液。

a. 提取細胞基因組時，加入蛋白(bái)酶K混勻後，55℃放(fàng)置5-10分鍾。

b. 提取組織基因組時，加入蛋白(bái)酶K混勻後，在55℃放(fàng)置，直至組織溶解。

注：不同組織裂解時間不同，通(tōng)常需1-3小(xiǎo)時即可完成（鼠尾需要消化過夜）,期間間歇颠倒混勻樣品。

3. 加入10 μl RNaseA（10 mg/ml）溶液，混勻後室溫放(fàng)置2分鍾。

4. 加入220 μl緩沖液GB，充分颠倒混勻，70℃放(fàng)置10分鍾，溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋内壁的水(shuǐ)珠。

注：加入緩沖液GB時可能(néng)會(huì)産生(shēng)白(bái)色沉澱，一(yī)般70℃放(fàng)置一(yī)段時間後會(huì)消失。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，會(huì)影響DNA的純度和得率，而且可能(néng)導緻步驟6中離心柱堵塞。

5．加入220 μl 無水(shuǐ)乙醇，颠倒混勻，簡短離心以去除管蓋内壁的水(shuǐ)珠。

注：加入乙醇後會(huì)産生(shēng)絮狀沉澱，可用槍頭反複抽打1-2次将沉澱弄碎後再上(shàng)柱。如果絮狀物(wù)未做處理，容易導緻步驟6中離心柱的堵塞。

6．将上(shàng)一(yī)步所得溶液和絮狀沉澱都加入一(yī)個(gè)吸附柱CG中（吸附柱放(fàng)入收集管中），11,000g離心2分鍾，倒掉廢液，吸附柱CG放(fàng)回收集管中。

注：如果出現吸附柱堵塞現象，可将離心時間延長(cháng)到(dào)5分鍾。

7．向吸附柱CG中加入500 μl去蛋白(bái)液GD（使用前請先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇），11,000g離心1分鍾，倒掉廢液，吸附柱CG放(fàng)入收集管中。

8．向吸附柱CG中加入700 μl 漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇），11,000g離心1分鍾，倒掉廢液，吸附柱CG放(fàng)入收集管中。

9．向吸附柱CG中加入500 μl 漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇），11,000g離心1分鍾，倒掉廢液。

10．将吸附柱CG放(fàng)回廢液收集管中，11,000g離心2分鍾。

注：此步驟非常重要，目的是将吸附柱中殘餘的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響後續的酶反應（酶切、PCR等）實驗。

11．将吸附柱CG轉入一(yī)個(gè)幹淨的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加100 μl經70℃水(shuǐ)浴預熱的洗脫緩沖液EB，室溫放(fàng)置2分鍾，11,000g離心2分鍾。

注；1. 洗脫緩沖液體積最好不少于100 μl，體積過小(xiǎo)影響回收效率。

2. 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水(shuǐ)做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5範圍内，pH值低(dī)于7.0會(huì)降低(dī)洗脫效率。

12. DNA産物(wù)-20℃保存。