電(diàn)泳還(hái)原與非還(hái)原區别

電(diàn)泳還(hái)原與非還(hái)原區别

聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）為(wèi)網狀結構，具有分子篩效應，它有兩種形式：非變性電(diàn)泳（Native-PAGE）和變性電(diàn)泳（SDS-PAGE）。非變性電(diàn)泳，在電(diàn)泳的過程中，蛋白(bái)質能(néng)夠保持完整狀态，并依據蛋白(bái)質的分子量大小(xiǎo)、形狀及其所附帶的電(diàn)荷量而逐漸呈梯度分開(kāi)；而變性電(diàn)泳（SDS-PAGE）僅根據蛋白(bái)質亞基分子量的不同分開(kāi)蛋白(bái)質（可以忽略電(diàn)荷因素）。SDS是陰離子去污劑，作為(wèi)變性劑和助溶試劑，它能(néng)斷裂分子内和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白(bái)分子的二、三級結構。

強還(hái)原劑，如巯基乙醇、二硫蘇糖醇（DTT）能(néng)使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。有些蛋白(bái)含有二聚體或多(duō)聚體，如果加入β-巯基乙醇，它會(huì)還(hái)原多(duō)聚蛋白(bái)之間和内部的二硫鍵，這樣，電(diàn)泳的樣品将會(huì)被完全還(hái)原成單體甚至亞基形式，不加還(hái)原劑的樣品則會(huì)保持聚體的形式。

SDS-PAGE有非還(hái)原SDS-PAGE和還(hái)原SDS-PAGE之分，均是變性條件(jiàn)下(xià)的電(diàn)泳。非還(hái)原與還(hái)原的區别是在樣品處理時是否加入還(hái)原劑（如β-巯基乙醇或DTT等）。

在進行電(diàn)泳方法選擇時，首先要明确目标蛋白(bái)的結構特點，以及電(diàn)泳目的預期，來決定是否需加入還(hái)原劑。

如需測定目标蛋白(bái)的純度及分子量（為(wèi)多(duō)聚體分子量），則一(yī)般采用非還(hái)原SDS-PAGE：采用該電(diàn)泳方法，二聚體、多(duō)聚體在凝膠中的位置會(huì)處于單體分子量2倍或多(duō)倍的位置，利于觀察及各組分的定性定量分析。當然這種蛋白(bái)的聚體形成是依靠二硫鍵來維持的。

如果僅需測定蛋白(bái)質亞基結構的分子量，則需采用還(hái)原SDS-PAGE，将二聚體、多(duō)聚體降解為(wèi)單體，理想情況下(xià)，若還(hái)原充分，僅可見(jiàn)亞基條帶。