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Western一(yī)抗二抗去除液(強堿,劇烈型)

Western一(yī)抗二抗去除液(強堿,劇烈型)

産品編号:WS1100-100ml

産品規格:100ml

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥50

Western一(yī)抗二抗去除液(強堿,劇烈型)

貨号

名稱

規格

WS1100-ml

Western一(yī)抗二抗去除液(強堿,劇烈型)

100 ml

WS1100-500ml

Western一(yī)抗二抗去除液(強堿,劇烈型)

500 ml








産品簡介:

Western一(yī)抗二抗去除液(強堿,劇烈型)(Western Antibody Stripping Buffer,basic,harsh type)可以高(gāo)效去除印迹膜上(shàng)的一(yī)抗和二抗,而吸附在膜上(shàng)的抗原基本不受影響,用于Western中轉移了蛋白(bái)膜的重複利用,可以轉一(yī)次膜,做多(duō)次Western印迹實驗,通(tōng)常可以重複利用膜3-5(PVDF膜)。使用本試劑隻需大約5-10分鍾(NC膜)或15-20分鍾(PVDF膜)即可實現蛋白(bái)膜的重複使用,然後可以進行Western的後續操作。

該産品具有以下(xià)幾個(gè)優點:

1.可用于昂貴或珍稀樣本的多(duō)次雜(zá)交;

2.有利于用不同抗體分析單次印迹上(shàng)的不同蛋白(bái),比如不同亞型的抗體;

3.有利于對異常結果進行重新分析或确認;

4.有利于糾正孵錯(cuò)的抗體;

5.節約試劑成本,并節約時間。

各種去除液的選擇請點擊Western一(yī)抗二抗去除液選擇指南(nán)

貯存:

   常溫貯存,有效期一(yī)年(nián);常溫運輸。

● 用前必讀(dú):

1. 理想的抗體去除液應該是洗脫抗體的同時,不洗脫膜上(shàng)結合的蛋白(bái)或者不改變抗原的結合性質,但是目前沒有一(yī)種去除液可以做到(dào)隻洗脫抗體,而完全不洗脫膜上(shàng)結合的抗原;也沒有一(yī)種去除液可以适用于所有不同親和度的抗原抗體複合物(wù)。去除液洗脫能(néng)力太強,抗原也容易被洗脫;太弱,則抗體殘留太高(gāo)。因此,從(cóng)免疫印迹膜上(shàng)去除抗體的方案僅能(néng)用于定性用途,因為(wèi)在每個(gè)抗體清除循環中,或多(duō)或少都将洗去少量膜上(shàng)的蛋白(bái)。

2. PVDF膜比硝酸纖維素膜(NC膜)更堅韌,因此優先推薦使用PVDF膜用于涉及抗體剝離的實驗。

3. 從(cóng)SDS-PAGE凝膠轉印完成後立即幹燥PVDF膜或NC膜,可改善蛋白(bái)質與膜的結合,特别推薦用于涉及多(duō)次抗體剝離的實驗。在第一(yī)輪抗體檢測之前,必須使用甲醇将幹燥的PVDF膜潤濕或用1×TBST将幹燥的NC膜潤濕。已經結合有抗體的膜,決不能(néng)使得膜幹燥,否則抗體分子将與膜結合緊密,很難剝離。因此,在做完一(yī)輪ECL發光(guāng)檢測實驗後,需要用清除液清除掉膜上(shàng)的抗體,推薦将膜浸泡于1×TBS(非1×TBST)中4度保存。

4. 檢測時,優先檢測低(dī)豐度抗原:先孵育條帶較弱(表達較低(dī))的蛋白(bái),再孵育條帶明顯(表達較高(gāo))的蛋白(bái),最後再孵育内參。

5. 如條件(jiàn)允許,下(xià)一(yī)輪的抗體雜(zá)交實驗選擇種屬來源不同的一(yī)抗(對應不同種屬的二抗),減少檢測的交叉反應。

6. 該清除液适用于ECL發光(guāng)檢測的膜上(shàng)抗體清除,不适合于膜上(shàng)直接顯色(DAB,BCIP/NBT等),不适合熒光(guāng)檢測。

使用說明:

1. 在完成Western化學發光(guāng)檢測後,NC膜或PVDF膜用适量蒸餾水(shuǐ)中震蕩漂洗5分鍾;重複漂洗2次。

2. 棄蒸餾水(shuǐ),加入适量的Western一(yī)抗二抗去除液,在搖床上(shàng)震蕩漂洗清除抗體。

孵育溫度和時間會(huì)明顯影響抗體去除效果,參照(zhào)下(xià)表調整。

膜類型

操作溫度

震蕩清除時間

備注

NC

18

15分鍾以上(shàng)

冬天實驗室氣溫低(dī)時

25

5-10 分鍾

常規樣品操作

PVDF

18

25分鍾以上(shàng)

冬天實驗室氣溫低(dī)時

25

15-20 分鍾

常規樣品操作

3. 棄去除液,加入足量蒸餾水(shuǐ),在搖床上(shàng)漂洗2次,每次5分鍾,把去除液徹底漂洗幹淨。

  注:殘餘的去除液會(huì)影響後續抗原抗體的的結合。

4. 可選步驟:漂洗後的轉印膜孵育ECL發光(guāng)液,檢測二抗的清除效率。曝光(guāng)5分鍾,膜上(shàng)看(kàn)不到(dào)發光(guāng)條帶表明二抗清除得比較幹淨。如果膜上(shàng)能(néng)看(kàn)到(dào)條帶,重複步驟2-3。

5.繼續進行Western的後續操作(封閉-抗體孵育-發光(guāng)檢測)。

   注:建議每次膜剝離後都要進行重新封閉,以降低(dī)背景。優先選用5%脫脂奶粉(貨号:WN1070)封閉,推薦常溫封閉1小(xiǎo)時;使用Western無蛋白(bái)快速封閉液(貨号:PF1070)時,NC膜需要封閉60分鍾;PVDF膜可以封閉10分鍾。

實驗示例:


Western一(yī)抗二抗去除液(堿性,劇烈型)檢測效果圖

Western一(yī)抗二抗清除液(堿性,劇烈型)檢測效果圖

樣品:K562細胞,SDS裂解液(貨号:RL1060)提取總蛋白(bái);

電(diàn)泳:4-20% RealPAGE預制膠(貨号:RTD6117-0420), 200 V 1×TGS  56 min

轉膜:NC膜,1×RealBlot快速轉膜液(貨号:RT5020)400 mA 40 min

圖1:5%脫脂奶粉封閉液(貨号:WN1070)  RT  60 min;一(yī)抗:Santa β-Actin鼠單抗(SC-47778) 1:2000  RT 60min;二抗:羊抗鼠IgG-HRP 1:5000(貨号:HGM1060)  RT 60min;ECL自(zì)動曝光(guāng)3秒(miǎo)

圖2:膜加入Western一(yī)抗二抗清除液(堿性,劇烈型),第1次清除,常溫25度,搖床5 min,ECL自(zì)動曝光(guāng)5分鍾,膜上(shàng)二抗條帶去除幹淨。

圖3:5%脫脂奶粉封閉液(貨号:WN1070),常溫搖床60分鍾,PCNA 1:5000(貨号:APM5012)  RT 60min,羊抗鼠IgG-HRP 1:5000 (貨号:HGM1060)RT 60min,自(zì)動曝光(guāng)11秒(miǎo),β-actin和PCNA同時有條帶,說明圖二中actin一(yī)抗沒有完全去除幹淨。

圖4:膜加入Western一(yī)抗二抗清除液(堿性,劇烈型),常溫24度 5 min第2次清除抗體,

Western無蛋白(bái)快速封閉液(貨号;PF1070)RT 60分鍾,一(yī)抗:Santa β-Actin鼠單抗(SC-47778) 1:4000 RT 60min,羊抗鼠IgG-HRP 1:5000(貨号:HGM1060)  RT 60min;ECL自(zì)動曝光(guāng)6秒(miǎo)。

圖5:膜加入Western一(yī)抗二抗清除液(堿性,劇烈型)第3次清除 26度 5min,

一(yī)抗:Santa β-Actin鼠單抗(SC-47778) 1:4000  RT 60min;

二抗:羊抗鼠IgG-HRP 1:5000(貨号:HGM1060)  RT 60min;ECL自(zì)動曝光(guāng)3分鍾。


 
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