10×Tris-甘氨酸轉膜緩沖液（濕轉，溶液型）
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産品編号
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産品名稱
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規格
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TB1040
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10×Tris-甘氨酸轉膜緩沖液（濕轉，溶液型）
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500 ml
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● 簡介：
10×Tris-甘氨酸轉膜緩沖液（濕轉，溶液型）可以用于Western時濕轉轉膜，原始配方是 Towbin buffer（1×）(Towbin et al. PNAS 1979，76:4350-4): 25 mM Tris, 192 mM glycine, 10-20 % 甲醇, SDS 0.01-0.1 %，pH ~8.3。為(wèi)方便客戶使用，10×轉膜緩沖液中沒有添加甲醇和SDS，客戶根據需要配制1×轉膜緩沖液時自(zì)行添加。
● 保存、運輸和貯存：
常溫保存，有效期兩年(nián)。
配成溶液後建議4℃保存，有效期6個(gè)月(yuè)。
1×即用型轉膜緩沖液建議現用現配，不建議保存。
● 1×即用型轉膜緩沖液配制方法：
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1×即用型轉膜緩沖液 配制量 1升
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10×Tris-甘氨酸轉膜緩沖液
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100
ml
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變性蛋白(bái)
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非變性蛋白(bái)
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＜20 kD蛋白(bái)
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無水(shuǐ)甲醇
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20%
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5-10%
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SDS
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0.01%
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0.01%
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20-80 kD蛋白(bái)
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無水(shuǐ)甲醇
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10%
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0-5%
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SDS
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0.05%
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0.05%
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＞80 kD蛋白(bái)
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無水(shuǐ)甲醇
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10%（NC膜）
0-5%（PVDF膜）
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0%
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SDS
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0.1%
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0.1%
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超純水(shuǐ)
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定容至1升，不要調節pH，pH~8.3
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注：甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白(bái)更加結合在膠上(shàng)，而SDS讓蛋白(bái)更加離開(kāi)膠。因此對大蛋白(bái)轉膜來說，多(duō)加SDS，少加甲醇；而對小(xiǎo)蛋白(bái)轉膜，多(duō)加甲醇，少加SDS。
● 轉膜：
1. 膜的選擇：轉膜可以選擇PVDF膜或NC膜。根據蛋白(bái)大小(xiǎo)選擇膜的孔徑。一(yī)般說來，大于20 kD蛋白(bái)選擇0.45
μm孔徑，低(dī)于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水(shuǐ)甲醇潤濕活化。
蛋白(bái)轉膜三明治制作：
負極（電(diàn)轉夾黑(hēi)色面）-海綿墊-1層1
mm厚度濾紙(zhǐ)-凝膠-膜-1層1
mm厚度濾紙(zhǐ)-海綿墊-正極（電(diàn)轉夾白(bái)色面）
3. 轉膜條件(jiàn)：
以下(xià)轉膜條件(jiàn)僅供參考，客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái)，最好經過1-2次預實驗後，确定最佳的轉膜條件(jiàn)。
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膜孔徑
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蛋白(bái)大小(xiǎo)
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穩流
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建議時間
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降溫措施
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0.22 μm
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低(dī)于20 kD
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200 mA
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~30分鍾
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不需要
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0.45 μm
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20-50 kD
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300 mA
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~45分鍾
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需要
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0.45 μm
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50-200 kD
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350 mA
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~50分鍾
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需要
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0.45 μm
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高(gāo)于200
kD
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350 mA
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~2.5-4.5小(xiǎo)時
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需要
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