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1×Western濕轉轉膜緩沖液(粉末型)

1×Western濕轉轉膜緩沖液(粉末型)

産品編号:TB1030P

産品規格:10×1L

數量
價格 ¥300

1×Western濕轉轉膜緩沖液(粉末型)

産品編号

産品名稱

規格

TB1030P

1×Western濕轉轉膜緩沖液(粉末型)

10×1

簡介

1×Western濕轉轉膜緩沖液(粉末型)可以用于Western時濕轉轉膜,原始配方是  Towbin buffer(1×)(Towbin et al. PNAS 197976:4350-4): 25 mM Tris, 192 mM glycine, 10-20 % 甲醇, SDS 0.01-0.1 %,pH ~8.3。為(wèi)方便客戶使用,1×轉膜緩沖液(粉末型)中沒有添加甲醇和SDS,客戶根據需要配制1×轉膜緩沖液時自(zì)行添加。

保存、運輸和貯存

常溫保存,有效期兩年(nián)。配成溶液後建議4℃保存,有效期6個(gè)月(yuè)。

加入甲醇或/和SDS的1×即用型轉膜緩沖液建議現用現配,不建議保存。

1×即用型轉膜緩沖液配制方法:

 

 

即用型轉膜緩沖液 配制量 1

 

1×Western濕轉轉膜緩沖液(粉末型)

一(yī)袋粉末

 

超純水(shuǐ)

600 ml

 

 

變性蛋白(bái)

非變性蛋白(bái)

20 kD蛋白(bái)

無水(shuǐ)甲醇

20%

5-10%

SDS

0.01%

0.01%

20-80 kD蛋白(bái)

無水(shuǐ)甲醇

10%

0-5%

SDS

0.05%

0.05%

80 kD蛋白(bái)

無水(shuǐ)甲醇

10%NC膜)

0-5%PVDF膜)

0%

SDS

0.1%

0.1%

 

超純水(shuǐ)

定容至1升,不要調節pHpH~8.3


注:甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白(bái)更加結合在膜上(shàng),而SDS讓蛋白(bái)更加離開(kāi)膜。因此對大蛋白(bái)轉膜來說,多(duō)加SDS,少加甲醇;而對小(xiǎo)蛋白(bái)轉膜,多(duō)加甲醇,少加SDS。

轉膜:

1. 膜的選擇:轉膜可以選擇PVDF膜或NC膜。根據蛋白(bái)大小(xiǎo)選擇膜的孔徑。一(yī)般說來,大于20 kD蛋白(bái)選擇0.45 μm孔徑,低(dī)于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水(shuǐ)甲醇潤濕活化。


蛋白(bái)轉膜三明治制作:

負極(電(diàn)轉夾黑(hēi)色面)-海綿墊-1層1 mm厚度濾紙(zhǐ)-凝膠-膜-1層1 mm厚度濾紙(zhǐ)-海綿墊-正極(電(diàn)轉夾白(bái)色面)

3. 轉膜條件(jiàn):

以下(xià)轉膜條件(jiàn)僅供參考,客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái),最好經過1-2次預實驗後,确定最佳的轉膜條件(jiàn)。

膜孔徑

蛋白(bái)大小(xiǎo)

穩流

建議時間

降溫措施

0.22 μm

低(dī)于20 kD

200 mA

~30分鍾

不需要

0.45 μm

20-50 kD

300 mA

~45分鍾

需要

0.45 μm

50-200 kD

350 mA

~50分鍾

需要

0.45 μm

高(gāo)于200 kD

350 mA

~2.5-4.5小(xiǎo)時

需要

 


 
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