1×Western濕轉轉膜緩沖液（粉末型）
|
産品編号
|
産品名稱
|
規格
|
|
TB1030P
|
1×Western濕轉轉膜緩沖液（粉末型）
|
10×1升
|
● 簡介：
1×Western濕轉轉膜緩沖液（粉末型）可以用于Western時濕轉轉膜，原始配方是 Towbin buffer（1×）(Towbin et al. PNAS 1979，76:4350-4): 25 mM Tris, 192 mM glycine, 10-20 % 甲醇, SDS 0.01-0.1 %，pH ~8.3。為(wèi)方便客戶使用，1×轉膜緩沖液（粉末型）中沒有添加甲醇和SDS，客戶根據需要配制1×轉膜緩沖液時自(zì)行添加。
● 保存、運輸和貯存：
常溫保存，有效期兩年(nián)。配成溶液後建議4℃保存，有效期6個(gè)月(yuè)。
加入甲醇或/和SDS的1×即用型轉膜緩沖液建議現用現配，不建議保存。
● 1×即用型轉膜緩沖液配制方法：
|
|
|
1×即用型轉膜緩沖液 配制量 1升
|
|
|
1×Western濕轉轉膜緩沖液（粉末型）
|
一(yī)袋粉末
|
|
|
超純水(shuǐ)
|
約600
ml
|
|
|
|
變性蛋白(bái)
|
非變性蛋白(bái)
|
|
＜20 kD蛋白(bái)
|
無水(shuǐ)甲醇
|
20%
|
5-10%
|
|
SDS
|
0.01%
|
0.01%
|
|
20-80 kD蛋白(bái)
|
無水(shuǐ)甲醇
|
10%
|
0-5%
|
|
SDS
|
0.05%
|
0.05%
|
|
＞80 kD蛋白(bái)
|
無水(shuǐ)甲醇
|
10%（NC膜）
0-5%（PVDF膜）
|
0%
|
|
SDS
|
0.1%
|
0.1%
|
|
|
超純水(shuǐ)
|
定容至1升，不要調節pH，pH~8.3
|
注：甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白(bái)更加結合在膜上(shàng)，而SDS讓蛋白(bái)更加離開(kāi)膜。因此對大蛋白(bái)轉膜來說，多(duō)加SDS，少加甲醇；而對小(xiǎo)蛋白(bái)轉膜，多(duō)加甲醇，少加SDS。
● 轉膜：
1. 膜的選擇：轉膜可以選擇PVDF膜或NC膜。根據蛋白(bái)大小(xiǎo)選擇膜的孔徑。一(yī)般說來，大于20 kD蛋白(bái)選擇0.45
μm孔徑，低(dī)于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水(shuǐ)甲醇潤濕活化。
蛋白(bái)轉膜三明治制作：
負極（電(diàn)轉夾黑(hēi)色面）-海綿墊-1層1
mm厚度濾紙(zhǐ)-凝膠-膜-1層1
mm厚度濾紙(zhǐ)-海綿墊-正極（電(diàn)轉夾白(bái)色面）
3. 轉膜條件(jiàn)：
以下(xià)轉膜條件(jiàn)僅供參考，客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái)，最好經過1-2次預實驗後，确定最佳的轉膜條件(jiàn)。
|
膜孔徑
|
蛋白(bái)大小(xiǎo)
|
穩流
|
建議時間
|
降溫措施
|
|
0.22 μm
|
低(dī)于20 kD
|
200 mA
|
~30分鍾
|
不需要
|
|
0.45 μm
|
20-50 kD
|
300 mA
|
~45分鍾
|
需要
|
|
0.45 μm
|
50-200 kD
|
350 mA
|
~50分鍾
|
需要
|
|
0.45 μm
|
高(gāo)于200
kD
|
350 mA
|
~2.5-4.5小(xiǎo)時
|
需要
|