Top10化學感受态細胞

目錄号：RTX303

儲存條件(jiàn)：-70℃凍存六個(gè)月(yuè)

産品包裝：

産品簡介：

本公司生(shēng)産的Top10感受态細胞采用經特殊工(gōng)藝處理得到(dào)，可用于DNA的化學轉化。使用pUC18質粒檢測，轉化效率可達10⁸cfu/μg，-70℃保存幾個(gè)月(yuè)轉化效率不發生(shēng)改變。

Top10菌株介紹：

基因型：F- mcrA △(mrr-hsdRMS-mcrBC) j80 lacZ△M15△?lacⅩ74 recA1 deoR araD139△(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

特點：一(yī)種用于鋪制與培養質粒平闆和粘粒平闆的重組缺陷的抑制型菌株。其j80 lacZ△M15基因的産物(wù)可與pUC載體編碼的 b-半乳糖苷酶氨基端實現a互補，可用于藍白(bái)斑篩選。

操作方法：（以下(xià)操作均按無菌條件(jiàn)的标準進行）

1取感受态細胞置于冰浴中，如需分裝可将剛融化細胞懸液分裝到(dào)無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。一(yī)次轉化感受态細胞的建議用量為(wèi)50-100 μl，可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過感受态細胞懸液體積的十分之一(yī)。

以下(xià)實驗以100 μl感受态細胞為(wèi)例。

2   向感受态細胞懸液中加入目的DNA（50 μl的感受态細胞能(néng)夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），輕輕旋轉離心管以混勻内容物(wù)，在冰浴中靜(jìng)置30分鍾。

3   将離心管置于42℃水(shuǐ)浴中放(fàng)置45秒(miǎo)，然後快速将管轉移到(dào)冰浴中，使細胞冷卻2-3分鍾，該過程不要搖動離心管。

4   向每個(gè)離心管中加入500 μl 無菌的SOC或LB培養基（不含抗生(shēng)素）， 混勻後置于37℃搖床振蕩培養45分鍾（150轉/分鍾），目的是使質粒上(shàng)相(xiàng)關的抗性标記基因表達，使菌體複蘇。

5将離心管内容物(wù)混勻，吸取100 μl已轉化的感受态細胞加到(dào)含相(xiàng)應抗生(shēng)素的SOB或LB固體瓊脂培養基上(shàng)，用無菌的彎頭玻棒輕輕的将細胞均勻塗開(kāi)。将平闆置于室溫直至液體被吸收，倒置平闆，37℃培養12-16小(xiǎo)時。

注：塗布用量可根據具體實驗來調整。如轉化的DNA總量較多(duō)，可取更少量轉化産物(wù)塗布平闆；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化産物(wù)塗布平闆。如果預計的克隆較少，可通(tōng)過離心（4,000 rpm, 2分鍾）後吸除部分培養液，懸浮菌體後将其塗布于一(yī)個(gè)平闆中。（塗布剩餘的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少可以将剩下(xià)的菌液再塗布新的培養闆）

注意事(shì)項：

1. 感受态細胞應保存在-70℃，不可多(duō)次凍融和放(fàng)置時間過長(cháng)，以避免感受态細胞的轉化效率。

2. 進行轉化操作時，應根據相(xiàng)應溫度及無菌條件(jiàn)的要求進行。

3. 為(wèi)防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，将損失降到(dào)最低(dī)。

1. 感受态細胞應保存在-70℃，不可多(duō)次凍融和放(fàng)置時間過長(cháng)，以避免感受态細胞的轉化效率。

2. 進行轉化操作時，應根據相(xiàng)應溫度及無菌條件(jiàn)的要求進行。

3. 為(wèi)防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，将損失降到(dào)最低(dī)。