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DH5α化學克隆感受态細胞

DH5α化學克隆感受态細胞

産品編号:RTX302

産品規格:50×100ul

數量
價格 ¥1000


DH5α化學克隆感受态細胞

目錄号:RTX302

儲存條件(jiàn):-70℃凍存六個(gè)月(yuè)

産品包裝:

 

貨号

RTX302-04

DH5α

50×100ml

Competent cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl)

10μl

産品簡介:

本公司生(shēng)産的DH5α感受态細胞采用經特殊工(gōng)藝處理得到(dào),可用于DNA的化學轉化。使用pUC18質粒檢測,轉化效率可達108cfu/μg,-70℃保存幾個(gè)月(yuè)轉化效率不發生(shēng)改變。

DH5α菌株介紹:

基因型:supE44△lacU169(j80 lacZ△M15)hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

特點:一(yī)種用于鋪制與培養質粒平闆和粘粒平闆的重組缺陷的抑制型菌株。其j80 lacZ△M15基因的産物(wù)可與pUC載體編碼的 b-半乳糖苷酶氨基端實現a互補,可用于藍白(bái)斑篩選。

操作方法:(以下(xià)操作均按無菌條件(jiàn)的标準進行)

1取感受态細胞置于冰浴中,如需分裝可将剛融化細胞懸液分裝到(dào)無菌預冷的離心管中,置于冰浴中。一(yī)次轉化感受态細胞的建議用量為(wèi)50-100 μl,可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過感受态細胞懸液體積的十分之一(yī)。

以下(xià)實驗以100 μl感受态細胞為(wèi)例。

2   向感受态細胞懸液中加入目的DNA(100 μl的感受态細胞能(néng)夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),輕輕旋轉離心管以混勻内容物(wù),在冰浴中靜(jìng)置30分鍾。

3   将離心管置于42℃水(shuǐ)浴中放(fàng)置45-90秒(miǎo),然後快速将管轉移到(dào)冰浴中,使細胞冷卻2-3分鍾,該過程不要搖動離心管。

4   向每個(gè)離心管中加入500 μl 無菌的SOC或LB培養基(不含抗生(shēng)素), 混勻後置于37℃搖床振蕩培養45分鍾(150轉/分鍾),目的是使質粒上(shàng)相(xiàng)關的抗性标記基因表達,使菌體複蘇。

5将離心管内容物(wù)混勻,吸取100 μl已轉化的感受态細胞加到(dào)含相(xiàng)應抗生(shēng)素的SOB或LB固體瓊脂培養基上(shàng),用無菌的彎頭玻棒輕輕的将細胞均勻塗開(kāi)。将平闆置于室溫直至液體被吸收,倒置平闆,37℃培養12-16小(xiǎo)時。

注:塗布用量可根據具體實驗來調整。如轉化的DNA總量較多(duō),可取更少量轉化産物(wù)塗布平闆;反之,如轉化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉化産物(wù)塗布平闆。如果預計的克隆較少,可通(tōng)過離心(4,000 rpm, 2分鍾)後吸除部分培養液,懸浮菌體後将其塗布于一(yī)個(gè)平闆中。(塗布剩餘的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少可以将剩下(xià)的菌液再塗布新的培養闆)

注意事(shì)項:

1. 感受态細胞應保存在-70℃,不可多(duō)次凍融和放(fàng)置時間過長(cháng),以避免感受态細胞的轉化效率。

2. 進行轉化操作時,應根據相(xiàng)應溫度及無菌條件(jiàn)的要求進行。

3. 為(wèi)防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接反應液,以重新轉化,将損失降到(dào)最低(dī)。



 
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