核酸快速高(gāo)靈敏度染色試劑盒
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産品編号
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規格
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貯存
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RTS5101
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25次
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常溫
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● 儲存、運輸及效期
常溫保存；常溫運輸；有效期一(yī)年(nián)。
● 産品簡介
核酸快速高(gāo)靈敏度染色試劑盒(Fast and High Sensitivity Stain Kit
for Nucleic Acids)是一(yī)種快速簡單、可用于聚丙烯酰胺凝膠中的核酸檢測的試劑盒。該方法檢測靈敏度比 EB 高(gāo)達 200 倍，能(néng)檢測到(dào)10ng的 DNA條帶，常用于檢測 SSR 标記、SNP 标記等。
本試劑盒可足夠用于25塊常規的8×10cm凝膠的染色。
說明書後附有實驗記錄表格，方便記錄實驗步驟。
● 産品組成：
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産品編号
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産品名稱
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規格
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貯存
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RTS5101-1
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試劑A-增敏液（10×）
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250 ml
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常溫
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RTS5101-2
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試劑B-加速液（10×）
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250 ml
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常溫
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RTS5101-3
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試劑C-染色溶液(100×)
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26 ml
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常溫，避光(guāng)
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RTS5101-4
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試劑D-基本顯色液(10×)
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250 ml
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常溫
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RTS5101-5
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試劑E-顯色加速液(500×)
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5 ml
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常溫，避光(guāng)
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● 注意事(shì)項：
1. 由于染色非常靈敏，操作時請注意盡量使用高(gāo)純度的水(shuǐ)，并确保所使用的器(qì)皿非常清潔，最好使用潔淨的玻璃器(qì)皿。操作時必須戴手套，避免皮膚和凝膠直接接觸。
2. 需自(zì)備無水(shuǐ)乙醇及MilliQ級純水(shuǐ)。
3. 下(xià)述使用說明中各種溶液的使用量适用于大小(xiǎo)為(wèi)8×10cm厚度為(wèi)0.75-1mm的凝膠。對于更大的凝膠，各種溶液的使用量需按凝膠面積的比例放(fàng)大，對于更厚的凝膠，作用時間需按照(zhào)厚度的比例适當延長(cháng)。
4. 本說明書所指的常溫溫度為(wèi)20-25℃，操作溫度較低(dī)時由于溶液的擴散能(néng)力下(xià)降，各步驟需适當延長(cháng)時間。
5. 基本顯色液(10×)在低(dī)溫環境下(xià)可能(néng)會(huì)出現沉澱，可在37℃水(shuǐ)浴中溶解，并充分混勻後使用。
● 使用方法：
一(yī). 漂洗步驟：
電(diàn)泳結束後，凝膠中加入100 ml MilliQ級純水(shuǐ)，在搖床上(shàng)常溫搖動2分鍾，搖動速度為(wèi)60-70rpm；重複此步驟1次。
二. 染色步驟：
2.1 染色：
棄水(shuǐ)，加入100 ml即用型染色液，在搖床上(shàng)常溫搖動5分鍾，搖動速度為(wèi)60-70 rpm。
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即用型染色液配制量 100 ml
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超純水(shuǐ)
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79 ml
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試劑A-增敏液（10×）
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10 ml
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試劑B-加速液（10×）
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10 ml
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試劑C-染色溶液(100×)
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1 ml
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注：即用型染色液配制後需在20分鍾内使用。
2.2 水(shuǐ)洗滌：
棄原有溶液，加入100 ml MilliQ級純水(shuǐ)或雙蒸水(shuǐ)，在搖床上(shàng)室溫搖動15-20秒(miǎo)，搖動速度為(wèi)60-70rpm。
注意：水(shuǐ)洗滌的時間不能(néng)超過20秒(miǎo)。
三. 顯色步驟：
棄水(shuǐ)，加入100 ml顯色液，在搖床上(shàng)室溫搖動3-10分鍾，直至出現比較理想的預期核酸條帶，搖動速度為(wèi)60-70rpm。
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顯色液配制量 100 ml
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超純水(shuǐ)
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89.8 ml
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試劑D-基本顯色液(10×)
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10 ml
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試劑E-顯色加速液(500×)
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0.2 ml
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注：顯色加速液(500X)有刺激性氣味，建議在通(tōng)風櫥内操作；
顯色液配制後需在20分鍾内使用。
四. 終止步驟：
棄顯色液，加入100 ml MilliQ級純水(shuǐ)，在搖床上(shàng)常溫搖動3-5分鍾，搖動速度為(wèi)60-70 rpm。
五. 保存：
可在MilliQ級純水(shuǐ)中保存；或采用适當的方式制備成幹膠。
● 常見(jiàn)問題：
一(yī). 背景太深：
1.1 顯色時間過長(cháng)。通(tōng)常顯色反應會(huì)在10分鍾内結束，顯色反應時間過長(cháng)會(huì)導緻背景很深。
1.2水(shuǐ)的純度太低(dī)。需使用大于16
MΩ·cm的高(gāo)純度水(shuǐ)。
二. 核酸條帶非常淺：
2.1 染色後水(shuǐ)洗滌時間過長(cháng)。在染色溶液染色後需嚴格控制水(shuǐ)洗滌的時間，水(shuǐ)洗滌的時間不能(néng)超過20秒(miǎo)，否則會(huì)導緻過多(duō)的染色離子被洗去，導緻檢測靈敏度下(xià)降。
2.2顯色加速液（500×）失效。顯色加速液（500×）不能(néng)低(dī)溫保存，低(dī)溫保存會(huì)導緻加速液失效。
三. 凝膠上(shàng)出現小(xiǎo)點或其它非核酸的痕迹：
3.1 凝膠沒有充分被溶液浸沒。請注意選擇大小(xiǎo)合适的容器(qì)，并加入足量的各種溶液，同時需保持适當的混勻速度确保凝膠可以被溶液浸沒。
3.2 用于染色的容器(qì)沒有充分洗滌幹淨。容器(qì)需先用洗滌劑充分洗滌，随後用自(zì)來水(shuǐ)充分沖洗，最後用高(gāo)純度水(shuǐ)再洗滌數次。該容器(qì)最好能(néng)專用于染色，并注意避免各種可能(néng)的污染。
3.3 指紋或其它壓痕。請注意戴手套操作，切勿直接接觸皮膚。操作時請注意盡量勿擠壓、折疊或摩擦凝膠。
3.4 有金屬物(wù)質接觸凝膠。金屬物(wù)質例如金屬鑷子等接觸凝膠會(huì)出現非特異性痕迹。
實驗記錄表格
實驗日期：
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約25-30分鍾
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标記√
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起始時間
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一(yī) 漂洗步驟
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水(shuǐ)漂洗
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2×2 min
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二 染色步驟
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染色
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5 min
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水(shuǐ)漂洗
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＜1 min
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三 顯色步驟
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顯色
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3-10 min
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四 終止步驟
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水(shuǐ)漂洗
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5 min
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五 保存
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實驗示例：
1 雙鏈DNA染色：
2 單鏈DNA/RNA染色：
使用RTS5101 核酸快速高(gāo)靈敏度染色試劑盒産品發表部分文章列表：
1. [2022 IF=8.4] A novel label-free
fluorescence aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III- and
SYBR Green I- aided amplification strategy.
Author：Yanxian
Wang, Kai Kang, Sui Wang,Weijun Kang, Cheng Cheng, Ling Mei Niu，Zhiyong
Guo.
Journal: Sensors and Actuators B: Chemical.
2019, 305:127348
Institution：Ningbo University
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.snb.2019.127348
2. [2022 IF=8.4] A robust photoluminescence
screening assay identifies uracil-DNA glycosylase inhibitors against prostate
cancer.
Author：Guodong
Li，Chung-Hang
Leung.
Journal: Chemical Science 2020,
11,1750–1760
Paper link：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8148385
3. [2022 IF=6.0] A novel resonance Rayleigh
scattering aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III assisted
signal ampli?cation by G – quadruplex nanowires formation
Author：Yanxian
Wang, Kai Kang, Sui Wang,LiMa, Weijun Kang,Xue Hui Liu, Ling Mei Niu , Zhiyong
Guo
Journal: Arabian Journal of Chemistry (2020)
13, 6598–6605
Institution：Ningbo University
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2020.06.016
4. [2022 IF=6] A novel ?uorescent sensor
based on aptamer recognition and DNA walker ampli?cation strategy and its
determination of 17b-estradiol.
Author: Yajun Zhang, Licong Jia, Wei Wang,
Meng Jiang, Hongying Zhang, LingMei Niu
Journal: Arabian Journal of Chemistry. 16
(2023) 105340.
Institution：School of Public Health, Hebei Medical
University
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2023.105340
5. [2022 IF=5.1] Repurposing sodium
stibogluconate as an uracil DNA glycosylase inhibitor against prostate cancer
using a time-resolved oligonucleotide-based drug screening platform.
Author: Sang-Cuo Nao, Le-Sheng Huang, Daniel
Shiu-Hin Chan, Xueliang Wang, Guo-Dong Li, Jia Wu, Chun-Yuen Wong, Wanhe Wang,
Chung-Hang Leung
Journal: Bioorganic Chemistry 144 (2024)
107176.
Institution：University of Macau
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.bioorg.2024.107176