RNAwait使用說明
樣品保存液
● 産品編号及規格:
RTR2305 100ml 200元
● 産品簡介:
RNA高(gāo)效保存液(RNAwait)是一(yī)種無毒的可直接使用的樣品儲存液,能(néng)使細胞内的RNA與RNA酶分離,可以快速可靠地保存動物(wù)組織、細胞内的RNA。組織獲取後立即浸入RNAwait保存液中,在室溫可以保存7天,4℃可以保存4周,-20℃、-80℃标本可以長(cháng)期保存,RNA穩定存在不降解,取出後用各類方法抽提可以獲得高(gāo)質量的RNA。
● 保存條件(jiàn):
15–25°C,保質期2年(nián)。低(dī)溫條件(jiàn)下(xià)有結晶析出時加熱至37°C溶解後使用。
● 操作流程:
1.根據要保存的各樣本的體積,計算(suàn)出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應當是組織體積的10倍(100mg組織約用1ml RNAwait);離心收集2×107細胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原則是:量甯多(duō)勿少。
建議在實際操作中不要稱量組織,而直接根據目測結果加入RNAwait量,以加快操作和減少污染。例如5mm邊長(cháng)的立方體組織塊,體積為(wèi)125mm3=125μl,故應當加入1.25ml的RNAwait液。
2.将RNAwait按需要量分裝入自(zì)備保存管中;
3. 快速将較大的組織切成厚度<0.5 cm的任意片狀,較小(xiǎo)的組織直接取下(xià),立即完全浸入RNAwait中。
注:組織的厚度一(yī)定要<0.5
cm。組織過厚則RNAwait不能(néng)有效滲入,組織中間部位的RNA不能(néng)受到(dào)保護。較大的組織可以切成厚度<0.5 cm的任意片狀後保存,較小(xiǎo)的組織(如大鼠的腎髒、脾髒,小(xiǎo)鼠的大部分器(qì)官)則可以直接浸入RNAwait。
4.保存時先将樣本浸入RNAwait後置4℃冰箱過夜(注:4℃過夜是必需的,這樣可使RNAwait完全滲入到(dào)組織中),然後轉移到(dào)-20℃冰箱(RNAwait在-20℃時可能(néng)為(wèi)液态,也可能(néng)為(wèi)固态,如有結晶析出,也是正常情況);或者在4℃冰箱過夜後,直接轉移到(dào)-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反複凍融至室溫20次不影響RNA的質量。
● 注意事(shì)項:
1. 組織和細胞取材速度要快,在獲取後應當盡快浸入RNAwait,以防止RNA降解。
2. 冰凍組織不能(néng)用RNAwait保存,因為(wèi)RNAwait不能(néng)有效滲入冰凍組織。
3.保存樣品的RNA提取:樣本從(cóng)-20℃或-80℃冰箱取出後,複溫到(dào)室溫後,取出組織塊,再用于提取RNA。細胞樣本則複溫後低(dī)速離心收集細胞,去除RNAwait,再用于提取RNA。後繼的處理(如組織勻漿)可以在室溫下(xià)進行,不必在液氮中操作,RNA仍能(néng)有效得到(dào)保護。殘留少量RNAwait保存液不影響後繼提取RNA的質量。
4. RNAwait在動物(wù)組織(如大鼠肝髒,脾髒)和細胞(如DH5α)RNA的保護中效果不錯(cuò);植物(wù)材料種類繁多(duō),沒能(néng)一(yī)一(yī)測試(煙(yān)草(cǎo)和拟南(nán)芥葉片中的RNA能(néng)被RNAwait有效保護),建議預實驗後再使用,