Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒（去垢劑兼容型）
Bradford Protein Assay Kit（Detergent Compatible）
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産品編号
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産品名稱
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包裝
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RTP7104
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Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒（去垢劑兼容型）
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800次
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● 試劑盒内容及保存：
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貨号
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産品名稱
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包裝
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貯存方式
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RTP7104-01
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考馬斯亮藍G-250染色液（去垢劑兼容型）
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250 ml
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4℃
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BSA-01
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牛血清白(bái)蛋白(bái)(BSA)标準溶液（5
mg/ml）
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2×1 ml
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-20℃
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RT0280-02
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PBS溶液
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10 ml
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4℃
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說明書
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1份
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● 儲存條件(jiàn)和效期：
考馬斯亮藍G-250染色液（去垢劑兼容型）4℃貯存；牛血清白(bái)蛋白(bái)标準溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。本試劑盒有效期1年(nián)。試劑盒常溫運輸。
● 産品簡介：
Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒(去垢劑兼容型)其原理是考馬斯亮藍G-250在酸性條件(jiàn)下(xià)和蛋白(bái)質結合，使得染料最大吸收峰從(cóng)465nm變為(wèi)595nm，在一(yī)定的線性範圍内，反應液595nm處吸光(guāng)度的變化量與反應蛋白(bái)量成正比，測定595nm處吸光(guāng)度的增加即可進行蛋白(bái)定量。該試劑盒進行了優化，能(néng)兼容一(yī)系列常見(jiàn)去垢劑和一(yī)定濃度的還(hái)原劑，并且檢測數據有很好的線性關系。本試劑盒的性能(néng)不僅優于常規的Bradford法，和BCA法相(xiàng)比也更加快速便捷。
蛋白(bái)研究中許多(duō)蛋白(bái)樣品都是含有去垢劑，因此常規Bradford法的使用受到(dào)了很大的限制，通(tōng)常隻能(néng)使用可以兼容去垢劑但檢測比較耗時的BCA法。但BCA法無法兼容還(hái)原劑。當蛋白(bái)樣品中同時含有一(yī)定濃度的去垢劑和還(hái)原劑時，常規的Bradford法和BCA法都無法使用，而本試劑盒仍然是可以檢測的。試劑盒兼容蛋白(bái)提取的多(duō)種裂解液，包括 Western及IP細胞裂解液、RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液等。
按照(zhào)每個(gè)10
μl樣品使用300 μl染色染色液計算(suàn)，試劑盒可以至少檢測800個(gè)樣品。
● 産品特點：
1.
檢測速度快，10-20個(gè)樣品隻需不足10分鍾即可完成。
2. 靈敏度高(gāo)，檢測濃度下(xià)限可達25
μg/ml （測定濃度範圍在50-1000 μg/ml内有較好的線性關系），最小(xiǎo)檢測蛋白(bái)量可達0.5
μg。
3. 該試劑盒測定蛋白(bái)濃度不受絕大部分樣品中的化學物(wù)質的影響。樣品中β-巯基乙醇的濃度可高(gāo)達1
M，DTT的濃度可高(gāo)達5
mM。同時，此方法測定蛋白(bái)濃度可以兼容受高(gāo)濃度的去垢劑影響，可以适用于膜蛋白(bái)樣品的濃度測定。蛋白(bái)樣品中SDS濃度低(dī)于1%，Triton
X-100濃度低(dī)于1%，Tween
20, 60, 80濃度低(dī)于1%，NP-40濃度低(dī)于1%都可以定量。
● 操作方法：
用前注意事(shì)項：
蛋白(bái)标準請全部溶解混勻後再使用。
需可檢測560-610 nm之間波長(cháng)的酶标儀一(yī)台，最佳檢測波長(cháng)為(wèi)595
nm。并需96孔微孔闆。
微孔闆測定程序：（最佳工(gōng)作範圍50-1000 μg/ml）
1． G-250染液在使用前應平衡溫度至常溫并溫和颠倒混勻。
2． 1
mg/ml蛋白(bái)标準品配制：常溫完全溶解蛋白(bái)标準品，取20
μl 5 mg/ml BSA蛋白(bái)标準溶液，加入80 μl PBS溶液，使其終濃度為(wèi)1 mg/ml。
3． 按照(zhào)下(xià)表配制BSA标準測定溶液：
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編号
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0
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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8
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1 mg/ml BSA 标準溶液 μl
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BSA标準溶液 μl
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0
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0.5
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1.5
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2.5
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5.0
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7.5
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10
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15
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20
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PBS 溶液 μl
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20
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19.5
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18.5
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17.5
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15
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12.5
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10
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5
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0
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BSA終濃度 μg/ml
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0
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25
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75
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125
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250
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350
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500
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750
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1000
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總體積 μl
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20 μl
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4． 取10 μl不同濃度蛋白(bái)标準加到(dào)96孔微孔闆的蛋白(bái)标準孔中。
5． 将适當體積的待測樣品加入到(dào)微孔闆中，如果樣品不足10
μl，用PBS補足到(dào)10
μl；
6． 向微孔闆中加入300 μl G-250染色液，混勻，常溫放(fàng)置 3-5 min。
7． 用酶标儀測定A595波長(cháng)的吸光(guāng)度，以不含BSA
的樣品的光(guāng)吸收值作為(wèi)空白(bái)對照(zhào)。可以立即測定吸光(guāng)度，也可以在30分鍾内測定，30分鍾内檢測數據無顯著變化。對于不含去垢劑和含有某些去垢劑的情況，在2小(xiǎo)時内檢測數據無顯著變化；對于含有某些特定去垢劑的情況，在2小(xiǎo)時内檢測數據會(huì)有一(yī)定的變化，但仍然會(huì)呈現較好的線性關系。
8． 以A595為(wèi)縱坐标，BSA含量為(wèi)橫坐标，繪制标準曲線，計算(suàn)樣品中的蛋白(bái)濃度。如果所得到(dào)的蛋白(bái)濃度不在标準曲線範圍内，請稀釋樣品後重新測定。
注：如使用分光(guāng)光(guāng)度計測定，可根據實際需要擴大溶液體積，保證蛋白(bái)标準溶液和蛋白(bái)樣品與
G-250染液的體積比為(wèi) 10:300，例如，如果需要 1.5 ml，可取蛋白(bái)樣品 50 μl，G-250染液試劑 1.5 ml。
試劑盒對常見(jiàn)去垢劑的兼容性