Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒

● 試劑盒内容及保存：

● 儲存條件(jiàn)和效期：

考馬斯亮藍G-250染色液4℃避光(guāng)保存；牛血清白(bái)蛋白(bái)标準溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。試劑盒常溫運輸；本試劑盒有效期1年(nián)。

● 産品簡介：

Bradford蛋白(bái)質濃度測定試劑盒是根據考馬斯亮藍G-250（Coomassie brilliant blue G-250）法研制而成，其原理是考馬斯亮藍G-250在酸性條件(jiàn)下(xià)和蛋白(bái)質結合，使得染料最大吸收峰從(cóng)465 nm變為(wèi)595 nm，在一(yī)定的線性範圍内，反應液595 nm處吸光(guāng)度的變化量與反應蛋白(bái)量成正比，測定595 nm處吸光(guāng)度的增加即可進行蛋白(bái)定量。

每個(gè)試劑盒可以檢測1000個(gè)樣品（使用微孔闆）或60個(gè)樣品（使用試管）

● 産品特點：

1. 檢測速度極快，10個(gè)樣品隻需不足10分鍾即可完成。

2. 靈敏度高(gāo)，檢測濃度下(xià)限可達25 μg/ml （測定濃度範圍在25-1000 μg/ml内有較好的線性關系，最佳測定濃度範圍為(wèi)50-750 μg/ml），最小(xiǎo)檢測蛋白(bái)量可達0.5 μg，待測樣品體積為(wèi)1-20 μl。

3. Bradford法測定蛋白(bái)濃度不受絕大部分樣品中的化學物(wù)質的影響。樣品中β-巯基乙醇的濃度可高(gāo)達1 M，DTT的濃度可高(gāo)達5 mM。然而，此方法測定蛋白(bái)濃度受高(gāo)濃度的去垢劑影響，故不能(néng)适用膜蛋白(bái)樣品的濃度測定。需确保測定樣品中SDS濃度低(dī)于0.01%，Triton X-100濃度低(dī)于0.05%，Tween 20, 60, 80濃度低(dī)于0.015%。測定含去垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白(bái)濃度測定試劑盒（RTP7102）。

● 操作方法

微孔闆測定程序：（最優工(gōng)作範圍50-750 μg/ml）

1．  G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和颠倒混勻；

2．  1 mg/ml蛋白(bái)标準品配制：常溫完全溶解蛋白(bái)标準品，取25 μl 5mg/ml BSA蛋白(bái)标準溶液，加入100 μl PBS溶液，使其終濃度為(wèi)1 mg/ml。

3．  按照(zhào)下(xià)表配制BSA标準測定溶液，建議做3個(gè)重複：

4．  将适當體積的待測樣品加入到(dào)微孔闆中，并用PBS補足到(dào)20 μl；

5．  向微孔闆中加入200 μl G-250染色液，混勻，室溫放(fàng)置5分鍾；

6．  測定595 nm 處的吸光(guāng)值，并記錄讀(dú)數；以不含BSA 的樣品的光(guāng)吸收值作為(wèi)空白(bái)對照(zhào)。

7．  以BSA含量為(wèi)縱坐标A₅₉₅讀(dú)數為(wèi)橫坐标，繪制标準曲線，計算(suàn)樣品中的蛋白(bái)濃度。如果所得到(dào)的蛋白(bái)濃度不在标準曲線範圍内，請稀釋樣品後重新測定。

試管測定程序：（最優工(gōng)作範圍50-750 μg/ml）

1. G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和颠倒混勻；

2. 1mg/ml蛋白(bái)标準品配制：室溫完全溶解蛋白(bái)标準品，取360 μl 5mg/ml BSA蛋白(bái)标準溶液，加入1440 μl PBS溶液，使其終濃度為(wèi)1.0 mg/ml。

3. 按照(zhào)下(xià)表配制BSA标準測定溶液，建議做3個(gè)重複：

4. 将适當體積的待測樣品加入到(dào)試管中，并用PBS補足到(dào)200 μl；

5. 向試管中加入3ml G-250染色液，混勻，室溫放(fàng)置3-5分鍾；

6. 測定595 nm 處的吸光(guāng)值，并記錄讀(dú)數；以不含BSA 的樣品的光(guāng)吸收值作為(wèi)空白(bái)對照(zhào)。

7. 以BSA含量為(wèi)縱坐标A₅₉₅讀(dú)數為(wèi)橫坐标，繪制标準曲線，計算(suàn)樣品中的蛋白(bái)濃度。如果所得到(dào)的蛋白(bái)濃度不在标準曲線範圍内，請稀釋樣品後重新測定。

實驗示例：