PAGE凝膠DNA回收試劑盒（吸附柱法）（目錄号：RTP3104）

● 試劑盒内容及保存：

● 運輸、儲存條件(jiàn)和效期：

常溫運輸，常溫保存，有效期為(wèi)一(yī)年(nián)。

● 産品簡介及使用說明：

本試劑盒适用于從(cóng)PAGE 膠中回收50-500 bp 的雙鏈DNA 片段，回收效率可達30-80%。該試劑盒采用特殊的吸附膜，能(néng)夠有選擇性地吸附核酸分子，去除其他雜(zá)質，得到(dào)高(gāo)質量的DNA回收産物(wù)。所得到(dào)的DNA可直接用于酶切、連接、測序等後續的分子生(shēng)物(wù)學試驗。

注：該試劑盒也能(néng)回收單鏈DNA片段，但回收效率偏低(dī)。

本試劑盒具有以下(xià)特點：

1. 适用範圍廣，回收效率高(gāo)，對于50-500 bp之間的DNA片段，回收效率在30-80%。

2. 操作簡單快速

3. 無需酚氯仿抽提，無需乙醇沉澱。

按照(zhào)每次使用200 μl提取液A計算(suàn)，試劑盒可以使用50次。

● 使用方法：

1.電(diàn)泳：

PAGE電(diàn)泳後染色觀察DNA 并确定需要回收的DNA 條帶的位置，确保目的DNA片段與其他片段分開(kāi)。

2.切膠：

用幹淨的刀片小(xiǎo)心切取含DNA片段的PAGE凝膠到(dào)一(yī)個(gè)幹淨的1.5 ml離心管中。

注：盡可能(néng)多(duō)地把多(duō)餘的膠切除，否則多(duō)餘的凝膠會(huì)降低(dī)DNA的回收效率。

3.DNA提取：

3.1 根據膠塊重量，每100 mg膠塊加200 μl比例加入提取液A（如膠塊不足100 mg，用滅菌水(shuǐ)補足100 mg），用塑料研磨杵充分将凝膠塊搗碎。

注：膠的重量控制在0.3克以下(xià)為(wèi)宜，否則會(huì)導緻DNA片段擴散提取不完全。

3.2  55℃水(shuǐ)浴30分鍾，間隙混勻，促進凝膠中的DNA擴散到(dào)溶液中。

3.3  13000 rpm離心5分鍾，小(xiǎo)心将上(shàng)清液(含DNA片段)轉移到(dào)一(yī)個(gè)新的1.5 ml離心管中。

4. 上(shàng)清液中依次加入3倍上(shàng)清體積結合液B和1倍上(shàng)清體積的助沉劑C，混勻。

注：如果此時溶液變為(wèi)粉紅(hóng)色，請加入少量3MNaAc pH5.2（一(yī)般說來，10 μl足矣），使溶膠液變為(wèi)黃色再上(shàng)柱離心。

5. 将上(shàng)一(yī)步所得溶液加入到(dào)吸附柱CA1中（吸附柱放(fàng)入收集管中），常溫放(fàng)置2分鍾，13,000 rpm離心60秒(miǎo)，倒掉收集管中的廢液，将吸附柱重新放(fàng)入收集管中。

注：吸附柱CA1的有效容積為(wèi)750 μl，如溶液體積大于750 μl，分次上(shàng)柱，保證全部溶液都加到(dào)吸附柱中。

6. 向吸附柱CA1中加入700 μl漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇），13,000 rpm離心60秒(miǎo)，倒掉廢液，将吸附柱重新放(fàng)入收集管中。

7. 向吸附柱CA1中加入500 μl漂洗液PW，13,000 rpm離心30-60秒(miǎo)，倒掉廢液。

8. 将離心吸附柱CA1放(fàng)回收集管中，13,000 rpm離心2分鍾，盡量除去漂洗液。

注：此步必不可少！如果漂洗液有殘留會(huì)影響回收效率和DNA質量，進而影響下(xià)遊實驗；離心後将吸附柱蓋子打開(kāi)，常溫放(fàng)置2分鍾，這樣将有助于徹底揮發殘餘乙醇。

9. 将吸附柱放(fàng)到(dào)一(yī)個(gè)幹淨1.5 ml離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加适量65℃預熱的洗脫緩沖液EB（一(yī)般不要少于30 μl），常溫放(fàng)置2分鍾。13,000 rpm離心1分鍾收集DNA溶液。

注：CA1柱的洗脫體積不應少于30 μl，體積過小(xiǎo)将會(huì)降低(dī)回收效率；洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。由于PAGE膠中片段較小(xiǎo)，不建議用水(shuǐ)進行洗脫。

10. DNA産物(wù)-20℃保存。

● 實驗示例：