瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒
● 試劑盒内容：
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試劑盒組成
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RTP2201-02 （100次）
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RTP2201-03（200次）
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溶膠液PN
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100 ml
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2×100
ml
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3 M NaAc pH5.2
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500μl
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500μl
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漂洗液PW
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25 ml
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2×25 ml
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洗脫緩沖液EB
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15 ml
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15 ml
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吸附柱CA1
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100個(gè)
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2×100個(gè)
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收集管（2 ml）
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100個(gè)
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2×100個(gè)
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說明書
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1份
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1份
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● 儲存條件(jiàn)：
本試劑盒在室溫（15–25℃）幹燥條件(jiàn)下(xià)，可保存12個(gè)月(yuè)；更長(cháng)時間的保存可置于2–8℃。（注意：當低(dī)溫貯存時，使用前應先将試劑盒内的溶液在室溫中放(fàng)置一(yī)段時間，必要時可在37℃水(shuǐ)浴中預熱10-20分鍾，以平衡溶液溫度。）
● 産品簡介：
本試劑盒采用可以高(gāo)效、專一(yī)結合DNA的矽基質材料和獨特的緩沖液系統，從(cóng)TAE或TBE瓊脂糖凝膠上(shàng)回收DNA片段，同時去除蛋白(bái)質、其它有機(jī)化合物(wù)、無機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物(wù)等雜(zá)質。可回收100 bp–40 kb大小(xiǎo)的片段，回收率大于80%（<100 bp 和>10kb 的DNA片段回收率為(wèi)30－50 %）。
每個(gè)吸附柱每次最多(duō)可吸附的DNA量約為(wèi)20
μg。
使用本試劑盒回收的DNA可适用于各種常規操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化等實驗。
● 産品特點：
1 溶膠液PN為(wèi)亮黃色，便于觀察膠是否徹底融化和溶膠體系的pH是否合适。
2 操作快捷，單個(gè)樣品操作少于15分鍾。
注意事(shì)項：請務必在使用本試劑盒之前閱讀(dú)此注意事(shì)項。
1 電(diàn)泳時最好換用新鮮的電(diàn)泳緩沖液，以免影響電(diàn)泳和回收效果；如有可能(néng)，盡量使用TAE系統，因為(wèi)有研究指出使用TBE系統後，回收産物(wù)中的痕量硼酸會(huì)影響後續的酶切反應。
2 切膠時，紫外照(zhào)射時間應盡量短，以免對DNA造成損傷；請盡量去除不含目的片段的瓊脂糖凝膠，這将會(huì)對融膠很有幫助。
3 第一(yī)次使用前請按照(zhào)标簽說明在漂洗液PW中加入無水(shuǐ)乙醇，并做好标記，用完後緊擰瓶蓋。
● 操作步驟：
如非指出，所有離心步驟均為(wèi)使用台式離心機(jī)在室溫下(xià)離心。
1 将單一(yī)的目的DNA條帶從(cóng)瓊脂糖凝膠中切下(xià)（盡量切除多(duō)餘部分）放(fàng)入幹淨的離心管中，稱取重量。
2 向膠塊中加入3倍體積溶膠液PN （如果凝膠重為(wèi)100mg，其體積可視為(wèi)100 μl，則加入300 μl溶膠液），55℃水(shuǐ)浴放(fàng)置10分鍾，其間不斷溫和地上(shàng)下(xià)翻轉離心管，以确保膠塊充分溶解。
注意：
① 如果此時溶膠液變為(wèi)粉紅(hóng)色，請加入少量3MNaAc pH5.2（一(yī)般說來，10μl足矣），使溶膠液變為(wèi)黃色再上(shàng)柱離心。
② 對于高(gāo)濃度的凝膠（>2％），按照(zhào)100mg凝膠加入100μl滅菌水(shuǐ)和600μl溶膠液PN的比例加入溶膠液PN。
③ 膠塊完全溶解後最好将膠溶液溫度降至室溫再上(shàng)柱，因為(wèi)吸附柱在較高(gāo)溫度時結合DNA的能(néng)力較弱。
3
可選步驟：當目的片段<500bp時，如想提高(gāo)回收效率，向溶膠體系種加入1/3溶膠液PN體積的異丙醇（如使用300μl溶膠液，則加入100μl異丙醇），混勻，55℃溫浴1分鍾後再進行步驟4。當目的片段>500bp時，省略此步驟，直接進行步驟4。
4 将上(shàng)一(yī)步所得溶液加入到(dào)吸附柱CA1中（吸附柱放(fàng)入收集管中），室溫放(fàng)置2分鍾，13,000
rpm離心60秒(miǎo)，倒掉收集管中的廢液，将吸附柱重新放(fàng)入收集管中。
注意：
1 吸附柱CA的有效容積為(wèi)700μl，如溶膠體系體積大于700μl，分次上(shàng)柱，保證全部溶液都加到(dào)吸附柱中。
2
<100bp和>10kb的片段請在室溫放(fàng)置10分鍾，這将會(huì)提高(gāo)回收效率。
5 向吸附柱中加入700μl漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇），13,000 rpm離心60秒(miǎo)，倒掉廢液，将吸附柱重新放(fàng)入收集管中。
6 向吸附柱中加入500μl漂洗液PW，13,000
rpm離心30-60秒(miǎo)，倒掉廢液。
7 将離心吸附柱CA1放(fàng)回收集管中，13,000 rpm離心2分鍾，盡量除去漂洗液。
注意：此步必不可少！如果漂洗液有殘留會(huì)影響回收效率和DNA質量，進而影響下(xià)遊實驗；離心後将吸附柱蓋子打開(kāi)，室溫放(fàng)置2分鍾，這樣将有助于徹底揮發殘餘乙醇。
8 将吸附柱放(fàng)到(dào)一(yī)個(gè)幹淨離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加适量洗脫緩沖液EB（一(yī)般不要少于30μl），室溫放(fàng)置2分鍾。13,000 rpm離心1分鍾收集DNA溶液。
注意：
1可将洗脫緩沖液EB預熱到(dào)70℃後再加到(dào)吸附膜上(shàng)，這樣可以提高(gāo)洗脫效率。
2 CA1柱的洗脫體積不應少于30
μl，體積過小(xiǎo)将會(huì)降低(dī)回收效率。
3洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水(shuǐ)做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5範圍内，pH值低(dī)于7.0會(huì)降低(dī)洗脫效率
9 DNA産物(wù)-20℃保存。
RTP2201 瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒發表文章
1. [2008 IF=1.749] Development of a sequence-characterized
ampli?ed region marker for diagnosis of dwarf bunt of wheat and detection of
Tilletia controversa Kuhn.
Author: J.H. Liu, L. Gao, T.G. Liu and W.Q. Chen
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Letters in Applied Microbiology 2009,49,235-240
Institution：Institute of
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Paper link： https://doi.org/10.1111/j.1472-765X.2009.02645.x
2. [2009 IF=2.435] Characterization of three new S-alleles
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Product: RTP2201瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Tree Genetics & Genomes (2010)
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Agricultural University
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3. [2010 IF=0.921] An ISSR-based Approach for the Molecular
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Author: Li Gao,Wanquan Chen and Taiguo Liu
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: J Phytopathol 159:155–158 (2011)
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4. [2010 IF=1.359] Curing the Plasmid pXO2 from Bacillus
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Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Curr Microbiol (2011) 62:703–709
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5. [2010 IF=1.993] Computation-assisted SiteFinding-PCR for
isolating flanking sequence tags in rice
Author: Hongru Wang, Jun Fang, Chengzheng Liang, Minghui He, Qiye Li, and
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Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: BioTechniques Vol. 51 | No. 6 | 2011
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Promote Banana (Musa AAA) Somatic Embryogenesis.
Author: H. Shu & L. Xu & Z. Li & J. Li & Z. Jin & S. Chang
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Appl Biochem Biotechnol (2014)
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Experimental Station, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Paper link：https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-014-1228-0
7. [2020 IF=1.857] Characterization and Developmental
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terrestris (Hymenoptera: Apidae).
Author: Yakai Tian, Yingping Qu,Kun Dong,Shaoyu He,Wu Jie, and Jiaxing Huang
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Journal of Insect Science (2021) 21(5): 13; 1–8
Institution：Institute of
Apicultural Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences
Paper link：https://doi.org/10.1093/jisesa/ieab078
8. [2022 IF= 1.7] VvAGAMOUS Affect Development of Four
Different Grape Species Ovary.
Author: Pengfei Zhang, Yuqin Zhang1, Qifeng Zhao, Tiequan Niu, Pengfei Wen and
Jinjun Liang
Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒
Journal: Phyton-International Journal of
Experimental Botany (2023) , vol.92, no.4
Institution：College of
Horticulture, Shanxi Agricultural University
Paper link：https://doi.org/10.32604/phyton.2023.026227