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瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

産品編号:RTP2201-02

産品規格:100次

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥240

瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

試劑盒内容:

試劑盒組成

RTP2201-02 100次)

RTP2201-03200次)

溶膠液PN

100 ml

2×100 ml

3 M NaAc pH5.2

500μl

500μl

漂洗液PW

25 ml

2×25 ml

洗脫緩沖液EB

15 ml

15 ml

吸附柱CA1

100個(gè)

2×100個(gè)

收集管(2 ml

100個(gè)

2×100個(gè)

說明書

1

1

儲存條件(jiàn):

本試劑盒在室溫(15–25℃)幹燥條件(jiàn)下(xià),可保存12個(gè)月(yuè);更長(cháng)時間的保存可置于2–8℃。(注意:當低(dī)溫貯存時,使用前應先将試劑盒内的溶液在室溫中放(fàng)置一(yī)段時間,必要時可在37℃水(shuǐ)浴中預熱10-20分鍾,以平衡溶液溫度。)

産品簡介:

本試劑盒采用可以高(gāo)效、專一(yī)結合DNA的矽基質材料和獨特的緩沖液系統,從(cóng)TAE或TBE瓊脂糖凝膠上(shàng)回收DNA片段,同時去除蛋白(bái)質、其它有機(jī)化合物(wù)、無機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物(wù)等雜(zá)質。可回收100 bp–40 kb大小(xiǎo)的片段,回收率大于80%(<100 bp 和>10kb 的DNA片段回收率為(wèi)30-50 %)。

每個(gè)吸附柱每次最多(duō)可吸附的DNA量約為(wèi)20 μg。

使用本試劑盒回收的DNA可适用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化等實驗。

 

産品特點:

1 溶膠液PN為(wèi)亮黃色,便于觀察膠是否徹底融化和溶膠體系的pH是否合适。

2 操作快捷,單個(gè)樣品操作少于15分鍾。

 

注意事(shì)項:請務必在使用本試劑盒之前閱讀(dú)此注意事(shì)項。

1 電(diàn)泳時最好換用新鮮的電(diàn)泳緩沖液,以免影響電(diàn)泳和回收效果;如有可能(néng),盡量使用TAE系統,因為(wèi)有研究指出使用TBE系統後,回收産物(wù)中的痕量硼酸會(huì)影響後續的酶切反應。

2 切膠時,紫外照(zhào)射時間應盡量短,以免對DNA造成損傷;請盡量去除不含目的片段的瓊脂糖凝膠,這将會(huì)對融膠很有幫助。

3 第一(yī)次使用前請按照(zhào)标簽說明在漂洗液PW中加入無水(shuǐ)乙醇,并做好标記,用完後緊擰瓶蓋。


 

操作步驟:

如非指出,所有離心步驟均為(wèi)使用台式離心機(jī)在室溫下(xià)離心。

1 将單一(yī)的目的DNA條帶從(cóng)瓊脂糖凝膠中切下(xià)(盡量切除多(duō)餘部分)放(fàng)入幹淨的離心管中,稱取重量。

2 向膠塊中加入3倍體積溶膠液PN (如果凝膠重為(wèi)100mg,其體積可視為(wèi)100 μl,則加入300 μl溶膠液),55℃水(shuǐ)浴放(fàng)置10分鍾,其間不斷溫和地上(shàng)下(xià)翻轉離心管,以确保膠塊充分溶解。

注意:

  如果此時溶膠液變為(wèi)粉紅(hóng)色,請加入少量3MNaAc pH5.2(一(yī)般說來,10μl足矣),使溶膠液變為(wèi)黃色再上(shàng)柱離心。

 ② 對于高(gāo)濃度的凝膠(>2%),按照(zhào)100mg凝膠加入100μl滅菌水(shuǐ)和600μl溶膠液PN的比例加入溶膠液PN。

  膠塊完全溶解後最好将膠溶液溫度降至室溫再上(shàng)柱,因為(wèi)吸附柱在較高(gāo)溫度時結合DNA的能(néng)力較弱。

3 可選步驟:當目的片段<500bp時,如想提高(gāo)回收效率,向溶膠體系種加入1/3溶膠液PN體積的異丙醇(如使用300μl溶膠液,則加入100μl異丙醇),混勻,55℃溫浴1分鍾後再進行步驟4。當目的片段>500bp時,省略此步驟,直接進行步驟4。

4 将上(shàng)一(yī)步所得溶液加入到(dào)吸附柱CA1中(吸附柱放(fàng)入收集管中),室溫放(fàng)置2分鍾,13,000 rpm離心60秒(miǎo),倒掉收集管中的廢液,将吸附柱重新放(fàng)入收集管中。

注意:

1 吸附柱CA的有效容積為(wèi)700μl,如溶膠體系體積大于700μl,分次上(shàng)柱,保證全部溶液都加到(dào)吸附柱中。

2 <100bp>10kb的片段請在室溫放(fàng)置10分鍾,這将會(huì)提高(gāo)回收效率。

5 向吸附柱中加入700μl漂洗液PW(使用前請先檢查是否已加入無水(shuǐ)乙醇),13,000 rpm離心60秒(miǎo),倒掉廢液,将吸附柱重新放(fàng)入收集管中。

6 向吸附柱中加入500μl漂洗液PW,13,000 rpm離心30-60秒(miǎo),倒掉廢液。

7 将離心吸附柱CA1放(fàng)回收集管中,13,000 rpm離心2分鍾,盡量除去漂洗液。

注意:此步必不可少!如果漂洗液有殘留會(huì)影響回收效率和DNA質量,進而影響下(xià)遊實驗;離心後将吸附柱蓋子打開(kāi),室溫放(fàng)置2分鍾,這樣将有助于徹底揮發殘餘乙醇。

8 将吸附柱放(fàng)到(dào)一(yī)個(gè)幹淨離心管中,向吸附膜中間位置懸空滴加适量洗脫緩沖液EB(一(yī)般不要少于30μl),室溫放(fàng)置2分鍾。13,000 rpm離心1分鍾收集DNA溶液。

注意:

1可将洗脫緩沖液EB預熱到(dào)70後再加到(dào)吸附膜上(shàng),這樣可以提高(gāo)洗脫效率。

2 CA1柱的洗脫體積不應少于30 μl,體積過小(xiǎo)将會(huì)降低(dī)回收效率。

3洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水(shuǐ)做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5範圍内,pH值低(dī)于7.0會(huì)降低(dī)洗脫效率

9 DNA産物(wù)-20℃保存。

 

RTP2201 瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒發表文章

1. [2008 IF=1.749] Development of a sequence-characterized ampli?ed region marker for diagnosis of dwarf bunt of wheat and detection of Tilletia controversa Kuhn.

Author: J.H. Liu, L. Gao, T.G. Liu and W.Q. Chen

Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒

Journal: Letters in Applied Microbiology 2009,49,235-240

InstitutionInstitute of Plant Protection ,Chinese Academy of Agricultural Sciences

Paper link https://doi.org/10.1111/j.1472-765X.2009.02645.x

 

2. [2009 IF=2.435] Characterization of three new S-alleles and development of an S-allele-specific PCR system for rapidly identifying the S-genotype in apple cultivars.

Author: Shenshan Long, Maofu Li, Zhenhai Han, Kun Wang, Tianzhong Li

Product: RTP2201瓊脂糖凝膠回收試劑盒

Journal: Tree Genetics & Genomes (2010) 6:161–168

InstitutionChina Agricultural University

Paper link https://link.springer.com/article/10.1007/s11295-009-0237-6

 

3. [2010 IF=0.921] An ISSR-based Approach for the Molecular Detection and Diagnosis of Dwarf Bunt of Wheat, Caused by Tilletia controversa Kuhn.

Author: Li Gao,Wanquan Chen and Taiguo Liu

Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒

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Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒

Journal: Curr Microbiol (2011) 62:703–709

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5. [2010 IF=1.993] Computation-assisted SiteFinding-PCR for isolating flanking sequence tags in rice

Author: Hongru Wang, Jun Fang, Chengzheng Liang, Minghui He, Qiye Li, and Chengcai Chu

Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒

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Author: H. Shu & L. Xu & Z. Li & J. Li & Z. Jin & S. Chang

Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒

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Paper linkhttps://link.springer.com/article/10.1007/s12010-014-1228-0

 

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Author: Yakai Tian, Yingping Qu,Kun Dong,Shaoyu He,Wu Jie, and Jiaxing Huang

Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒

Journal: Journal of Insect Science (2021) 21(5): 13; 1–8

InstitutionInstitute of Apicultural Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences

Paper linkhttps://doi.org/10.1093/jisesa/ieab078

 

8. [2022 IF= 1.7] VvAGAMOUS Affect Development of Four Different Grape Species Ovary.

Author: Pengfei Zhang, Yuqin Zhang1, Qifeng Zhao, Tiequan Niu, Pengfei Wen and Jinjun Liang

Product: RTP2201 瓊脂糖凝膠回收試劑盒

Journal: Phyton-International Journal of Experimental Botany (2023) , vol.92, no.4

InstitutionCollege of Horticulture, Shanxi Agricultural University

Paper linkhttps://doi.org/10.32604/phyton.2023.026227

 


 
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