單鏈RNA Marker（15-50 nt）
● 産品編号及規格：
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貨号
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名稱
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規格
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貯存
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RTM505-01
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單鏈RNA Marker（15-50 nt）
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60 μl
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-20℃
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RTM505-02
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2×RNA上(shàng)樣緩沖液 (尿素變性膠，RNase-free)
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1 ml
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-20℃
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● 産品簡介：
單鏈RNA Marker由不同長(cháng)度的單鏈RNA分子混合而成，5條帶的大小(xiǎo)為(wèi)15，20，25，30， 40，50
nt。樣品保存在 TE緩沖液中，每條帶濃度約為(wèi)100 ng/μl（配成即用型RNA Marker後，每條帶的濃度約為(wèi)50
ng/μl）。使用前與等體積2×RNA上(shàng)樣緩沖液混合即可上(shàng)樣電(diàn)泳。該Marker适用于跑尿素變性膠，電(diàn)泳後可以使用核酸染料如RealSafe
Red（貨号：GR002）或RealSafe
All（貨号：GR004）均可以染色得到(dào)清晰的條帶分離效果。
産品内附帶2×RNA上(shàng)樣緩沖液 (尿素變性膠，RNase-free)。以每次上(shàng)樣5
μl計算(suàn)，混合好的單鏈RNA
Marker可以使用大約25次。
● 保存條件(jiàn)和運輸：
-20℃貯存，有效期24個(gè)月(yuè)；濕冰運輸。
● 使用方法：
注：以下(xià)使用方法均以8×10cm凝膠 厚1.0mm示例，其他規格凝膠請适當調整。
一(yī). 凝膠制備：
1.1 可以選擇RNA尿素PAGE電(diàn)泳試劑盒（Cat：RTE4103））或按照(zhào)以下(xià)程序制膠。
1.2．分離膠配制：根據表格一(yī)，将不同體積的成分混合，漩渦攪拌至尿素徹底溶解。
表一(yī) TBE-尿素PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，适用于厚度1.0 mm小(xiǎo)闆膠)
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RNA長(cháng)度
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最佳凝膠濃度
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尿素(克)
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40%PAA
（29:1）
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10×TBE
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RNase-free水(shuǐ)
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.1克
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0.625 ml
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0.5 ml
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至體積5 ml
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50 μl
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5 μl
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50-400 nt
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8%
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2.1克
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1 ml
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0.5 ml
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至體積5 ml
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50 μl
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5 μl
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30-300 nt
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10%
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2.1克
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1.25 ml
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0.5 ml
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至體積5 ml
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50 μl
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5 μl
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40-200 nt
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12%
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2.1克
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1.5 ml
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0.5 ml
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至體積5 ml
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50 μl
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5 μl
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10-150 nt
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15%
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2.1克
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1.875 ml
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0.5 ml
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至體積5 ml
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50 μl
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5 μl
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6-100 nt
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20%
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2.1克
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2.5 ml
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0.5 ml
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至體積5 ml
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50 μl
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5 μl
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1.3在凝膠模具中灌入适量分離膠溶液（對于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃闆頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然後在分離膠溶液上(shàng)輕輕覆蓋一(yī)層1-5 cm的水(shuǐ)層，使凝膠表面保持平整。
1.4靜(jìng)置10-20分鍾，待分離膠和水(shuǐ)層之間出現一(yī)個(gè)清晰的界面後，說明凝膠已聚合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。
1.5去除覆蓋在分離膠上(shàng)的水(shuǐ)層；按照(zhào)表二将不同體積成分在一(yī)個(gè)小(xiǎo)燒杯中混合；最後加入10%過硫酸铵和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免産生(shēng)氣泡。
表二 TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml，适用于1.0mm厚度膠)
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各組份體積（ml）
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尿素
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40%PAA（29:1）
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10×TBE
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RNase-free水(shuǐ)
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10%APS
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TEMED
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0.84克
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0.2 ml
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0.2 ml
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補至體積2 ml
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20 μl
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2 μl
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1.6将濃縮膠溶液加至分離膠的上(shàng)面，直至凝膠溶液到(dào)達前玻璃闆的頂端；将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。
1.7常溫靜(jìng)置30-60分鍾，等待濃縮膠聚合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。
二. 樣品制備：
2.1
取适量體積單鏈RNA
Marker樣品與等體積的2×RNA上(shàng)樣緩沖液 (尿素變性膠，RNase-free)混合，70℃處理5分鍾，冰浴制冷後待上(shàng)樣。待測樣品也需要進行同樣處理。
三.電(diàn)泳：
3.1. 預電(diàn)泳（可選）：電(diàn)泳槽内外加入适量1×TBE緩沖液穩壓200V預電(diàn)泳30分鍾。電(diàn)泳結束後，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次，去除殘餘的尿素。
3.2.上(shàng)樣：根據梳齒确定Marker上(shàng)樣量， 一(yī)般是10齒1mm厚梳子Marker上(shàng)樣5 μl，15齒1mm厚梳子上(shàng)樣3 μl。
3.3. 連接電(diàn)源線，打開(kāi)電(diàn)源開(kāi)關，按照(zhào)以下(xià)條件(jiàn)電(diàn)泳。
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恒電(diàn)壓
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起始電(diàn)流
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結束電(diàn)流
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電(diàn)泳時間
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适用條件(jiàn)
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推薦電(diàn)壓
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200V
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15-20 mA/闆膠
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10-15 mA/闆膠
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60+ min
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最佳電(diàn)壓，最優的分辨率
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3.4. 等待上(shàng)樣緩沖液的溴酚藍指示前沿到(dào)凝膠底部時終止電(diàn)泳，取出凝膠進行後續實驗。
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變性膠濃度
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溴酚藍
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二甲苯菁
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5%
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35 nt
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130 nt
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8%
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19 nt
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75 nt
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10%
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15 nt
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55 nt
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15%
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10 nt
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52 nt
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20%
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5 nt
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35 nt
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四．染色：
單鏈RNA推薦用RealSafe Red（貨号：GR002）或RealSafe
All（貨号：GR004）染色，兩種染料均可以得到(dào)清晰的條帶分離效果。
注：其餘染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。
● 注意事(shì)項：
1. 單鏈RNA Marker産品适用于變性PAGE垂直電(diàn)泳，不适用于水(shuǐ)平瓊脂糖凝膠電(diàn)泳。
2. 建議單鏈RNA Marker現用現配，因為(wèi)混合有上(shàng)樣緩沖液的單鏈RNA穩定性不好。
3. ssRNA實驗樣品序列和實驗樣品上(shàng)樣量的不同，顯示的片段大小(xiǎo)與Marker可能(néng)會(huì)有微弱的差别。
● 電(diàn)泳示例：
1. 使用RealSafe Red核酸染料（貨号：GR002）染色：
2. 使用核酸快速高(gāo)靈敏度染色試劑盒（貨号：RTS5101）染色：
