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Long Taq DNA聚合酶(含GC buffer)

Long Taq DNA聚合酶(含GC buffer)

産品編号:RTL3102G-02

産品規格:500U

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥500


 Long Taq DNA Polymerase

長(cháng)片段DNA聚合酶

目錄号

濃度

包裝

RTL3102-02

5 U/μl

500 U 100μl

RTL3102-03

5 U/μl

5×500 U5×100μl

● 貯存

  -20℃保存一(yī)年(nián)。

● 産品簡介

Long Taq DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照(zhào)一(yī)定的比例混合而成。兩種酶協同作用實現了擴增效率、合成速度和延伸性能(néng)的完美統一(yī),在長(cháng)片段PCR反應中具有獨特的優勢,可以合成超長(cháng)的DNA片段。另外,此酶具有比Taq DNA聚合酶約5倍的PCR可信度。該酶的大多(duō)數PCR産物(wù)3’端帶堿基A,可以通(tōng)過TA克隆法進行克隆。

● 産品組成(RTL3102-02

Long Taq DNA Polymerase(5U/μl)              100μl

10×Long Taq PCR buffer(含Mg2)              1ml

2×GC buffer                                    2×1 ml

 

産品組成(RTL3102-03

Long Taq DNA Polymerase(5U/μl)              5×100μl

10×Long Taq PCR buffer(含Mg2)              5×1ml

2×GC buffer                                    10×1 ml

● 活性定義

1單位(U) Taq DNA Polymerase活力定義為(wèi)在74、30分鍾内,以活性化的大馬哈魚精子DNA作為(wèi)模闆/引物(wù),将10 nmol脫氧核苷酸摻入到(dào)酸不溶物(wù)質所需的酶量。

● 酶貯存緩沖液

50 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;50 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol

● 适用範圍

短鏈和長(cháng)鏈DNA擴增,特别适合于長(cháng)片段DNA的擴增。

● 使用說明:

1. 按照(zhào)下(xià)表在0.2ml PCR管中制備反應體系:

 

成分

體積

終濃度

Template

0.1-1μg

as you wish

Primer 110 μM

1μl

200nM

Primer 210 μM

1μl

200nM

10×Long Taq PCR buffer

5μl

dNTP Mixture(10 mM)

1μl

200μM each

Long Taq (5 U/μl)

0.5-1μl

2.5-5U

ddH2O

up to 50μl

-

2. 混勻後,離心快甩将反應液收集到(dào)管底。

3. PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話,補加25μl礦物(wù)油。

4. PCR儀上(shàng)執行以下(xià)程序:

三步法:

步驟

溫度

時間

循環數

初始變性

94

1-5 min

1

變性

94

30 sec

25-40*

退火

Tm-5*

30 sec

延伸

72

1 min/kb

最後延伸

72

5 min

1

兩步法:

步驟

溫度

時間

循環數

初始變性

94

1-5 min

1

變性

94

30 sec

25-40*

退火和延伸

68

1 min/kb

最後延伸

72

5 min

1

*注: PCR 反應條件(jiàn)視模闆、引物(wù)等的結構條件(jiàn)不同而各異。在實際操作中需根據模闆、目的片段的大小(xiǎo)、堿基序列和引物(wù)的長(cháng)短等具體情況,設定最佳的反應條件(jiàn)(溫度、時間等)。

 

● 使用舉例:

●   常見(jiàn)問題:

Q1: Long Taq DNA polymerase能(néng)擴增多(duō)長(cháng)片段?

A1:對簡單模闆(如λ噬菌體做模闆),可以擴增20kb片段;對複雜(zá)模闆(如基因組DNA),可以擴增8kb片段。

 

Q2:Long Taq DNA polymerase保真性怎樣?

A2:Long Taq含有3-5校對活性的聚合酶,有校對功能(néng)。保真性為(wèi)普通(tōng)Taq酶的5倍。

 

Q3: Long Taq DNA polymerase是否隻能(néng)擴增長(cháng)片段?

A3:Long Taq也能(néng)很好的擴增低(dī)于5kb的片段,隻是在長(cháng)片段擴增中更有優勢。

 

Q4:進行長(cháng)片段PCR時,為(wèi)什麽推薦使用2階段溫度PCR法?

A4:長(cháng)片段PCR擴增時要設計比較長(cháng)的引物(wù),以增加引物(wù)的特異性,而長(cháng)引物(wù)的Tm比較高(gāo)。在進行長(cháng)片段PCR時,退火溫度和延伸溫度間的差距很小(xiǎo),當退火溫度超過60℃時,退火溫度和延伸溫度可以設定為(wèi)一(yī)個(gè)溫度,一(yī)般為(wèi)68℃,這樣進行2階段溫度PCR,在長(cháng)片段PCR中能(néng)得到(dào)更好的效果。

 

Q5:使用Long Taq DNA polymerase的擴增産物(wù)是否可以進行TA克隆?

A5:由于使用Long Taq得到(dào)的PCR産物(wù)大多(duō)數帶有A,可以進行TA克隆。然而,如果想提高(gāo)TA克隆的連接效率,建議加A後再進行TA克隆。

 

Q6:Long Taq DNA polymerase可以擴增高(gāo)GC含量片段嗎(ma)?

A6:要擴增高(gāo)GC含量片段,建議使用Long Taq配合2×GC buffer使用;不建議使用10×Long Taq buffer。



 
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