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2×pfu PCR MasterMix 不含染料

2×pfu PCR MasterMix 不含染料

産品編号:RTH3103-03

産品規格:5×500μl

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥400

2×pfu PCR MasterMix

 産品包裝:

 

 

目錄号

包裝

2×pfu PCR MasterMix(不含染料)

RTH3103-02

500μl

RTH3103-03

5×500μl

2×pfu PCR MasterMix(含染料)

RTH3104-02

500μl

RTH3104-03

5×500μl

注:以50μl PCR反應體系為(wèi)例,每次使用25μl 2×MasterMix500μl可做20 50μl PCR反應。

 儲存條件(jiàn): -20℃可長(cháng)期保存;4℃穩定貯存3個(gè)月(yuè)。經常使用時,一(yī)旦融化後請4℃貯存,盡量避免反複凍融。

 産品簡介:

本産品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反應緩沖液、PCR反應的增強劑和優化劑以及穩定劑,濃度為(wèi)2×。使用時,隻需補加實驗所需的引物(wù)和模闆後即可進行PCR反應,可最大限度的減少人為(wèi)誤差,具有快速簡便、穩定性好等優點。用于高(gāo)保真的DNA片段的擴增。使用該産品得到(dào)的PCR擴增産物(wù)為(wèi)平滑末端,不可以直接用于TA克隆,要通(tōng)過平滑末端克隆法進行克隆。

 質量控制:

以λ DNA為(wèi)模闆,可以很好擴增5kb的DNA片段;以水(shuǐ)稻基因組為(wèi)模闆,可以很好擴增3.2kb的DNA片段。

●  使用說明:

1. 冰浴中徹底融化2×MasterMix,混勻後Minispin将溶液收集到(dào)管底。

2. 按照(zhào)下(xià)表在0.2ml PCR管中制備反應體系:

 

50μl反應體系

終濃度

2×MasterMix

25μl

上(shàng)遊引物(wù) 10μM

1-5μl

0.2-0.8 μM

下(xià)遊引物(wù) 10μM

1-5μl

0.2-0.8 μM

模闆

× μl

10pg-1μg

水(shuǐ)

補至50μl

 

3. 快甩離心将反應液收集到(dào)管底。

4. PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話,補加25μl礦物(wù)油。

5. PCR儀上(shàng)執行以下(xià)程序:

步驟

溫度

時間

循環數

初始變性

94

5 min

1

變性

94

30 sec

25-40*

退火

Tm-5*

30 sec

延伸

72

0.5kb/min

最後延伸

72

5 min

1

*注: PCR 反應條件(jiàn)視模闆、引物(wù)等的結構條件(jiàn)不同而各異。在實際操作中需根據模闆、目的片段的大小(xiǎo)、堿基序列和引物(wù)的長(cháng)短等具體情況,設定最佳的反應條件(jiàn)(溫度、時間等)。

6. 電(diàn)泳檢測。

 注:使用含染料的2×MasterMix可以直接上(shàng)樣;不含染料的2×MasterMix要與6×loading buffer混合後上(shàng)樣。



1% agarose gel,RealSafe Red stain
lane 1: 1800bp,Rice fragement
lane 2: 1000bp, plasmid fragement
lane 3: 500bp, plasmid fragement


 
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