DNA退火緩沖液(5×)
● 産品組成：
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貨号
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名稱
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規格
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貯存
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RTE3105
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DNA退火緩沖液(5×)
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5×1ml
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-20℃
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● 保存：-20℃
● 産品簡介：
DNA寡核苷酸退火緩沖液(Annealing
Buffer for DNA Oligos)簡稱為(wèi)DNA退火緩沖液，是一(yī)種可用于DNA oligo退火的緩沖液，可用于常規的DNA oligo的退火，尤其适合于較難退火的用于RNAi (也稱siRNA)質粒構建的DNA oligo的退火。該緩沖液能(néng)有效避免DNA oligo自(zì)身形成發夾結構，并且兩條oligo退火後可以直接和經酶切、純化的質粒連接，轉化後可以得到(dào)大量的陽性克隆。
本試劑操作簡單，隻需把待退火的DNA oligo和退火緩沖液按照(zhào)一(yī)定比例混合後，置于PCR儀上(shàng)進行程序降溫，約90min即可完成。
● 操作步驟(僅供參考)：
1、 把待退火的DNA oligo用經滅菌水(shuǐ)配制成50μM，同時徹底溶解退火緩沖液（5×）備用。
2、 按如下(xià)反應體系操作：
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順序
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組份
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體積
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1
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滅菌水(shuǐ)
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40μl
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2
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退火緩沖液(5×)
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20μl
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3
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DNA oligo A(50μM)
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20μl
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4
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DNA oligo B(50μM)
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20μl
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Total
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100μl
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按照(zhào)上(shàng)述順序，依次加入并混勻，如果所用PCR儀沒有加熱蓋，可加入Mineral Oil防止液體揮發。
3、 按如下(xià)PCR儀的退火條件(jiàn)：
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步驟
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溫度
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時間
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作用
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1
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95℃
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2min
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Oligo充分變性
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2
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每90s下(xià)降1℃，降至25℃
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約90min
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程序退火
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3
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-20℃
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長(cháng)期保存
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暫時存放(fàng)
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注：如果使用的PCR儀無梯度降溫功能(néng)，也可以95℃處理後自(zì)然冷卻至常溫。