蛋白(bái)濃縮試劑盒（目錄号：RTD9101）
● 試劑盒内容及保存：
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貨号
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産品名稱
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規格
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貯存
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RTD9101-01
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試劑A-沉澱溶液
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10 ml
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RT
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RTD9101-03
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試劑C-助沉劑
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5 ml
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RT
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RTD9101-04
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試劑D-中和液
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250 μl
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RT
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RTD9101-05
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1 M NaCl
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1 ml
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RT
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RTD9101-06
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1×SDS-PAGE蛋白(bái)上(shàng)樣緩沖液（變性，還(hái)原）
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1 ml
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-20℃
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說明書
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1份
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● 儲存條件(jiàn)和效期：
試劑盒常溫運輸；收到(dào)後，按照(zhào)标簽溫度貯存；本試劑盒有效期1年(nián)。
● 産品簡介：
試劑盒原理：在酸性條件(jiàn)下(xià)蛋白(bái)質形成不溶性鹽，使蛋白(bái)質變性導緻構象發生(shēng)改變，蛋白(bái)暴露出較多(duō)的疏水(shuǐ)性基團，蛋白(bái)發生(shēng)聚集而沉澱。為(wèi)了避免酸對後續電(diàn)泳的影響，沉澱的蛋白(bái)要使用丙酮等洗滌液徹底清洗去除酸。濃縮後的蛋白(bái)可以用于SDS-PAGE和Western
blot 前的蛋白(bái)樣品處理。
以每次濃縮800
μl蛋白(bái)樣品計算(suàn)，本試劑盒可以使用40-45次。
● 操作方法：
1. 準備1.5
ml幹淨的離心管，加入800 μl蛋白(bái)樣品溶液。
可選：如果樣品溶液中離子強度低(dī)于10
mM，補加8 μl的1M
NaCl溶液。低(dī)于800 μl的樣品，加入8
μl 1 M NaCl，用水(shuǐ)補齊體積至800 μl，使NaCl終濃度為(wèi)10
mM。
2.
加入蛋白(bái)溶液1/10體積的試劑C-助沉劑-80
μl，混勻，常溫靜(jìng)置15分鍾。
注：加入試劑C後溶液變渾濁。
3. 加入步驟2溶液1/4體積的試劑A
-220 μl，渦旋震蕩10-30秒(miǎo)，使之充分混勻。
4. 冰浴放(fàng)置15分鍾。
5. 4℃，12000
rpm（13000
g）離心10 分鍾。
注：離心後白(bái)色蛋白(bái)沉澱彌散性可見(jiàn)于離心管管壁上(shàng)。
6. 小(xiǎo)心去掉上(shàng)清液，保留沉澱。
注：請小(xiǎo)心操作，可以用移液器(qì)輔助徹底吸棄上(shàng)清。
7. 沉澱中加入600
μl預冷的丙酮（自(zì)備，試劑盒不提供），渦旋震蕩10-30秒(miǎo)，徹底混勻。
注：丙酮有刺激性氣味，請在通(tōng)風櫥内操作。
8. 冰浴15分鍾。
9.
4℃，12000
rpm（13000
g) 離心10分鍾；在通(tōng)風櫥中，倒掉上(shàng)清。殘留上(shàng)清用10
μl吸頭徹底吸棄，沉澱物(wù)通(tōng)風晾幹30-60秒(miǎo)。注：沉澱不能(néng)過分幹燥，否則将導緻蛋白(bái)不好溶解。
10.
蛋白(bái)溶解：
根據下(xià)表選擇溶解緩沖液：
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下(xià)遊實驗
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溶解緩沖液
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備注
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SDS-PAGE電(diàn)泳
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1×SDS-PAGE蛋白(bái)上(shàng)樣緩沖液（變性，還(hái)原）
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試劑盒提供
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加入溶解緩沖液後，徹底溶解沉澱（37℃溫浴處理），溶液正常顔色應為(wèi)藍色；如果溶液為(wèi)淡綠色或黃色，加入1/10體積中和液D，使顔色變回藍色。 95℃ 處理5分鍾，電(diàn)泳上(shàng)樣
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BCA蛋白(bái)定量
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40mM 碳酸鈉pH11.25
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試劑盒不提供
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BCA蛋白(bái)定量試劑盒測定蛋白(bái)濃度
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等電(diàn)聚焦IEF/2D電(diàn)泳
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7M尿素，2M硫脲，40mM Tris，1%C7B2O或1% ASB-14 pH10.4
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試劑盒不提供
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酶切實驗
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100 mM碳酸氫铵 pH8.5
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試劑盒不提供
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●實驗示例：
