PAGE膠蛋白(bái)微量回收試劑盒（貨号：RTD8108）       

● 試劑盒組成：

● 運輸、儲存條件(jiàn)和效期：

常溫運輸，标簽溫度保存，有效期為(wèi)一(yī)年(nián)。

● 産品簡介及使用說明：

蛋白(bái)電(diàn)泳不僅可用于檢測蛋白(bái)質的相(xiàng)對分子質量，而且也是分離純化蛋白(bái)質的重要工(gōng)具之一(yī)，随著(zhe)蛋白(bái)質技(jì)術(shù)的微量化，有必要從(cóng)凝膠中回收蛋白(bái)質以用于制備抗體、免疫印迹、氨基酸組分分析或末端序列測定等，本産品就(jiù)是專門(mén)為(wèi)此用途開(kāi)發的微量蛋白(bái)膠回收法，回收效率在50-80%。

按照(zhào)每次使用400 μl 溶液A計算(suàn)，試劑盒至少可以使用20 次。

● 使用方法：

1. 電(diàn)泳：

按常規方法進行變性（SDS-PAGE）或非變性蛋白(bái)電(diàn)泳（Native-PAGE）。

2. 切膠：

2.1 用手術(shù)刀片将銅染（貨号：RTD6207）或鋅染（貨号：RTD6206）的膠塊中含有目的條帶的部分膠切下(xià)（盡可能(néng)地把多(duō)餘的膠切除，否則會(huì)影響回收效率），放(fàng)入1.5 ml的離心管中，用相(xiàng)應的消除液将膠中蛋白(bái)質條帶脫色到(dào)膠體接近無色透明，超純水(shuǐ)漂洗凝膠兩次，保留膠體進行步驟3。

2.2 由于考馬斯亮藍染色蛋白(bái)的特殊性，不建議考染後進行切膠操作。建議把樣品分多(duō)孔上(shàng)樣，電(diàn)泳後隻切其中一(yī)個(gè)膠孔的膠條進行染色，然後将此膠條放(fàng)回到(dào)在整體膠中原來的位置，通(tōng)過顯色膠條上(shàng)的蛋白(bái)條帶找到(dào)在未染色膠上(shàng)對應區域，并切下(xià)膠體進行步驟3。

2.3 如不進行染色，可以使用預染Marker判斷目的蛋白(bái)的位置進行切膠進行步驟3。但此方法缺點在于蛋白(bái)的位置難以精确判斷。

3. 研磨處理：

3.1 稱取1.5 ml離心管中膠塊重量；用研磨杵充分将膠塊壓磨成盡可能(néng)細小(xiǎo)的碎片。

3.2 即用型溶液A配制：

    根據溶液A的使用量配制即用型溶液A的體積。配制比例為(wèi)：1 ml溶液A加入10 μl 1 M DTT溶液。

3.3根據膠塊重量加入即用型溶液A，用研磨杵再次充分研磨，4℃搖床慢(màn)搖洗脫過夜（12-16小(xiǎo)時）。

注：膠塊重量和即用型溶液A體積大體按照(zhào)1:4比例加入，如膠塊100 mg加入400 μl即用型溶液A，溶液A使用量甯多(duō)勿少。洗脫時間與凝膠濃度，蛋白(bái)分子量大小(xiǎo)有關，膠濃度越高(gāo)，分子量越大，洗脫時間越長(cháng)。

4. 過濾除膠：

用1 ml 的去尖吸頭吸取混合物(wù)至過濾柱中（過濾柱放(fàng)入收集管中），注意将碎膠一(yī)起吸入，溶液過多(duō)時可分次加入，12,000 rpm 離心2分鍾，保留收集管中的濾出液（包含蛋白(bái)）。

5. 蛋白(bái)沉澱：

     5.1 将濾出液轉移到(dào)1.5 ml離心管中，加入1/10體積的溶液B-助沉液，混勻，常溫放(fàng)置15 min。

     5.2 加入步驟5.1溶液1/4體積的溶液C-沉澱液，充分混勻後，冰浴15 min。

         注：加入溶液C後溶液變渾濁，需要徹底充分混勻。

5.3  4℃ 12,000 rpm離心10分鍾，去除上(shàng)清，保留蛋白(bái)沉澱。

   注：由于溶液B-助沉液的作用，此步驟得到(dào)管底很明顯的蛋白(bái)沉澱物(wù)。

6. 蛋白(bái)漂洗：

6.1 蛋白(bái)沉澱中加入1 ml預冷的丙酮（自(zì)備，試劑盒不提供），徹底重懸沉澱，混勻，冰浴放(fàng)置15 min。

6.2 4℃ 12,000 rpm離心10分鍾，去除上(shàng)清，保留沉澱。

    注：通(tōng)過丙酮的漂洗，去除步驟5.3中蛋白(bái)沉澱中的非蛋白(bái)組份。

6.3 離心管快甩離心，用10 μl吸頭将離心管中殘餘溶液徹底吸淨，常溫開(kāi)口風幹1-2分鍾，待殘留的液體揮發幹淨。

7. 蛋白(bái)貯存：

實驗示例：