植物(wù)總蛋白(bái)提取試劑盒（适用于模式植物(wù)）

Plant Total Protein Isolation Kit（for model plant）

● 産品貨号及規格

● 産品簡介

本産品用于快速提取模式植物(wù)的總蛋白(bái)，可以處理各種常見(jiàn)模式植物(wù)如拟南(nán)芥、小(xiǎo)麥、煙(yān)草(cǎo)、玉米、水(shuǐ)稻等植物(wù)的葉片、莖和根等。得到(dào)的蛋白(bái)可用于SDS-PAGE凝膠電(diàn)泳和Western印迹分析。

該試劑盒對模式植物(wù)的幼嫩組織有更好的提取效果，衰老組織和富含多(duō)糖多(duō)酚植物(wù)的蛋白(bái)提取效果不佳。此類植物(wù)的蛋白(bái)提取可以選擇通(tōng)用型植物(wù)蛋白(bái)提取試劑盒（貨号：RTD8103）。

該試劑盒含有除丙酮外的其他所有試劑，使用方便，能(néng)在2小(xiǎo)時内得到(dào)高(gāo)純度的蛋白(bái)樣品。

每次提取使用0.7 ml試劑B-植物(wù)蛋白(bái)提取緩沖液I計算(suàn)，該試劑盒可以使用20次。

●  使用方法：

實驗準備材料：

液氮；研缽；1.5ml離心管；丙酮；70℃水(shuǐ)浴鍋；幹浴器(qì)；冷凍離心機(jī)；制冰機(jī)；渦旋振蕩器(qì)。

I 樣品破碎：

1. 取植物(wù)樣本，在液氮條件(jiàn)下(xià)，用研缽充分研磨成粉末。

關鍵步驟：此步驟非常重要，樣本研磨越細越好，研磨不徹底會(huì)導緻蛋白(bái)濃度偏低(dī)。

II 沉澱雜(zá)質：

2. 取1.5 ml離心管，加入1 ml即用型試劑A（按照(zhào)下(xià)表配制），迅速将約0.1克粉末加入其中，漩渦混勻，RT 放(fàng)置5分鍾。

關鍵步驟：樣品粉末量不能(néng)超過0.1克，否則将導緻蛋白(bái)提取得率和純度大大降低(dī)。

即用型試劑A-樣本雜(zá)質去除劑配制

3.12000g4℃離心5分鍾，去除上(shàng)清，保留沉澱。

注：觀察沉澱顔色，如沉澱顔色為(wèi)綠色，繼續步驟4；如沉澱顔色為(wèi)淺色或白(bái)色，跳過步驟4，直接進行步驟5。

4. 沉澱中加入1 ml即用型試劑A，漩渦混勻，RT放(fàng)置5分鍾，12000rpm4℃離心5分鍾。

5. 沉澱中加入1 ml 預冷的丙酮（自(zì)備，試劑盒不提供）和10 μl DTT溶液，漩渦震蕩（此時溶液狀态應為(wèi)白(bái)色懸液），徹底重懸，12000rpm4℃離心5分鍾，去除上(shàng)清，收集沉澱。

6. 快甩離心數秒(miǎo)，殘留上(shàng)清用移液器(qì)徹底吸棄，沉澱物(wù)通(tōng)風晾幹1-2分鍾至沉澱幹燥。

  關鍵步驟：沉澱不能(néng)過分幹燥，否則會(huì)影響以下(xià)步驟蛋白(bái)的溶解性。

III 蛋白(bái)提取：

7. 蛋白(bái)沉澱中加入0.7 ml 即用型試劑B（按照(zhào)下(xià)表配制），漩渦震蕩，徹底重懸沉澱（此時溶液狀态為(wèi)懸浮溶液）；70℃水(shuǐ)浴1小(xiǎo)時，間歇混勻。

即用型試劑B-植物(wù)蛋白(bái)提取緩沖液配制：

8.12000g4℃離心10分鍾，小(xiǎo)心取上(shàng)清（通(tōng)常可取600 μl）于1.5ml離心管中，不要吸取沉澱。

9. 蛋白(bái)樣品-20℃貯存或進行下(xià)遊電(diàn)泳及Western Blot等實驗。

注： ① 如要濃縮蛋白(bái)，可以選擇蛋白(bái)濃縮試劑盒（貨号：RTD9101）。

    ② 由于提取過程中使用了DTT，為(wèi)了避免對蛋白(bái)濃度測定的影響，建議蛋白(bái)濃度測定使用Bradford方法（貨号：RTP7101）。