Tris-醋酸-SDS-PAGE電(diàn)泳試劑盒（變性電(diàn)泳）

● 産品組成：

● 産品簡介：

Tris-醋酸-SDS-PAGE凝膠電(diàn)泳适合于分離高(gāo)分子量蛋白(bái)，可以有效分離50-500 kD範圍内蛋白(bái)；電(diàn)泳體系呈中性，抑制半胱氨酸的二次氧化，防止二硫鍵在凝膠中交聯；在變性還(hái)原電(diàn)泳中，電(diàn)泳緩沖體系中加入抗氧化劑，整個(gè)電(diàn)泳過程都在還(hái)原條件(jiàn)下(xià)進行，有效防止二硫鍵的形成。

本公司提供的Tris-醋酸-SDS-PAGE電(diàn)泳試劑盒包含預制膠、蛋白(bái)上(shàng)樣、蛋白(bái)電(diàn)泳、染色及轉膜所需的全部試劑。試劑盒配套的預制膠為(wèi)梯度凝膠，濃度為(wèi)3-8%，厚度為(wèi)1.1 mm，12齒，每個(gè)泳道可以上(shàng)樣最大30 μl樣品。

本試劑盒用于蛋白(bái)變性電(diàn)泳，本試劑盒可以使用10次。

● 貯存及運輸：

   按照(zhào)标簽溫度貯存；試劑盒常溫運輸。

● 使用說明：

1. 實驗準備：

1.1 20×樣品還(hái)原劑為(wèi)幹粉，4℃貯存。用前加入1ml超純水(shuǐ)震蕩徹底溶解後使用，已經溶解的20×樣品還(hái)原劑-20℃貯存。

1.2 400×抗氧化劑為(wèi)幹粉，常溫貯存。用前加入15 ml超純水(shuǐ)震蕩徹底溶解後使用，已經溶解的400×抗氧化劑-20℃貯存。

2. 電(diàn)泳：

注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能(néng)VE-180，六一(yī)24K系列電(diàn)泳槽請确保密封條的安裝方向（如圖）。

六一(yī)其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電(diàn)泳槽可以直接使用預制膠。

不兼容Thermol系列電(diàn)泳槽。

2.2 準備1×電(diàn)泳緩沖液：

2.2.1 外槽緩沖液：取适量體積1×電(diàn)泳緩沖液用于外槽緩沖液。

2.2.2 内槽緩沖液：對于還(hái)原樣品電(diàn)泳，200 ml 1×電(diàn)泳緩沖液中加0.5 ml 400×抗氧化劑，混合均勻後用于内槽緩沖液。對于非還(hái)原樣品電(diàn)泳，直接在内槽中加入1×電(diàn)泳緩沖液，不要添加400×抗氧化劑。

2.3準備上(shàng)樣樣品：

注：表格以配制10 μl樣品為(wèi)例，其他體積按照(zhào)比例調整。

2.4電(diàn)泳過程；

在電(diàn)泳槽的内槽内加入1×電(diàn)泳緩沖液(讓電(diàn)泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次；随後在電(diàn)泳槽外槽加入适量的1×電(diàn)泳緩沖液。上(shàng)樣，電(diàn)泳。

3. 染色：

3.1 将電(diàn)泳後的PAGE膠取下(xià)放(fàng)入塑料容器(qì)中，加入适量FastBlue蛋白(bái)染色液（以剛剛覆蓋過膠面為(wèi)适），搖床常溫搖動，條帶5-10分鍾即可見(jiàn)（蛋白(bái)含量高(gāo)于1 μg條帶）。

3.2 搖床常溫繼續搖動15-30分鍾至條帶清晰可見(jiàn)。

3.3 加入适量蒸餾水(shuǐ)脫色，期間更換1-2次蒸餾水(shuǐ)，搖床常溫搖動10-15分鍾至背景幹淨。

3.4 觀察保存結果。

4. 轉膜：

4.1 轉印膜選擇：

Tris-醋酸凝膠轉膜可以使用NC膜和PVDF膜，需要選擇0.45 μm孔徑。PVDF膜使用前注意需要用甲醇潤濕活化。

4.2 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（溶液型）配制：

将10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（濕轉，粉末型）粉末溶解于500 ml超純水(shuǐ)中，即配成500 ml 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（溶液型），不要調節pH，pH~7.2。

4.3 準備1×轉膜緩沖液：

注：甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白(bái)更加結合在膜上(shàng)，而SDS讓蛋白(bái)更加離開(kāi)膜。因此對大蛋白(bái)轉膜來說，多(duō)加SDS，少加甲醇；而對小(xiǎo)蛋白(bái)轉膜，多(duō)加甲醇，少加SDS。

4.4 轉膜條件(jiàn)：

以下(xià)轉膜條件(jiàn)僅供參考，客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái)，最好經過1-2次預實驗後，确定最佳的轉膜條件(jiàn)。