彩虹預染超低(dī)分子量蛋白(bái)質Marker III（1.5-45 kD）

Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker III（1.5-45 kD）

●産品編号及規格：

RTD6147   10 T（50 μl）

● 儲存、運輸及效期：

  -20℃保存，濕冰運輸，有效期1年(nián)。

● 産品簡介：

    彩虹預染超低(dī)分子量蛋白(bái)質Marker III可以直接觀察蛋白(bái)電(diàn)泳及清晰判斷Western Blotting的轉膜效果。本産品由7種多(duō)肽和蛋白(bái)質組成，分子量大小(xiǎo)為(wèi) 1.5 kD，4 kD（紅(hóng)色），8 kD， 15 kD（綠色），20 kD， 30 kD，45 kD (注：蛋白(bái)大小(xiǎo)已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預染蛋白(bái)Marker标定過。)

● 使用說明：

第一(yī)次收到(dào)該産品，常溫融化後，徹底混勻，離心快甩将溶液完全收集到(dào)管底。

一(yī). 制膠：

說明：可以根據以下(xià)步驟自(zì)己制備凝膠。也可以選擇Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電(diàn)泳試劑盒（貨号：RTD6122）進行實驗。

1.1 配制分離膠

1.1.1 按照(zhào)表1将組份加入到(dào)小(xiǎo)燒杯中混合。

1.1.2加入10%APS和TEMED，立即混勻5-10秒(miǎo)，以使溶液充分混勻。

1.1.3 在玻璃闆中迅速灌入适量分離膠溶液，使液面和短玻璃闆上(shàng)沿之間的距離比梳齒長(cháng)0.5 cm即可（注：此溶液為(wèi)過量，請勿全部注入）。然後在分離膠溶液上(shàng)輕輕覆蓋一(yī)層1-2 cm的無水(shuǐ)乙醇，使凝膠表面保持平整。

1.1.4 靜(jìng)置15-30分鍾，待分離膠和乙醇層之間出現一(yī)個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據表1的标準條件(jiàn)調節促凝劑的加入量。分離膠25℃條件(jiàn)下(xià)，約20分鍾可以聚合。

表1  （一(yī)塊1 mm mini膠用量）

1.2 配制濃縮膠

1.2.1 去除覆蓋在分離膠上(shàng)的乙醇層，用濾紙(zhǐ)将殘留乙醇吸去。

1.2.2 按照(zhào)表1将各組份加入到(dào)小(xiǎo)燒杯中混合。

1.2.3 加入10%過硫酸铵和TEMED，立即混勻5-10秒(miǎo)，以使溶液充分混勻。

1.2.4 将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。

1.2.5 靜(jìng)置30-60分鍾裝待凝膠聚合

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據表1的标準條件(jiàn)調節促凝劑的加入量。濃縮膠25℃條件(jiàn)下(xià)，約40分鍾可以聚合。

二. 電(diàn)泳：

2.1 取Marker樣品，充分混勻後備用。不要加熱處理。

2.2 電(diàn)泳前，将10×陽極緩沖液（Cat No：AB080）和10×陰極緩沖液（Cat No：CB010）用蒸餾水(shuǐ)稀釋成1×緩沖液備用。将電(diàn)泳槽的外槽加入1×陽極緩沖液，内槽加入1×陰極緩沖液，輕柔拔出梳子，将Marker或蛋白(bái)樣品（已經過2×Tricine上(shàng)樣緩沖液[Cat No：TP050]處理）加入點樣孔，參考下(xià)表進行電(diàn)泳，至每條帶都清晰可見(jiàn)時停止電(diàn)泳。整個(gè)電(diàn)泳過程大約需要2-3個(gè)小(xiǎo)時。

表2 多(duō)肽電(diàn)泳條件(jiàn)

三. 染色

根據常規實驗步驟，用配方6和7（表3）進行染色和觀察。如果使用配方6進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的FastBlue蛋白(bái)染色液（Cat No：RTD6202），該産品除具有染色快，無毒，靈敏性高(gāo)等特點外，還(hái)能(néng)對小(xiǎo)肽在染色中起到(dào)固定作用，不至于小(xiǎo)肽在染色和脫色中從(cóng)凝膠中脫離，是常規染色液的理想替代品。

表3 小(xiǎo)分子蛋白(bái)質SDS-PAGE電(diàn)泳試劑配制