非變性凝膠蛋白(bái)電(diàn)泳試劑盒（含預制膠）
Native PAGE Gel Protein Electrophoresis Kit
|
貨号
|
名稱
|
規格
|
|
RTD6135
|
非變性凝膠蛋白(bái)電(diàn)泳試劑盒
|
10次
|
● 産品組成：
|
貨号
|
名稱
|
規格
|
貯存
|
|
RTD6117-0415
|
RealPAGE Tris-Gly預制膠4-15%
|
10闆
|
4℃
|
|
PL111
|
5×非變性非還(hái)原蛋白(bái)上(shàng)樣緩沖液
|
1 ml
|
-20℃
|
|
TG130P
|
5×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液（粉末型）
|
1 L
|
RT
|
|
RTD6202-02
|
FastBlue蛋白(bái)染色液
|
500 ml
|
RT
|
● 運輸和貯存：
本産品常溫運輸；組份按照(zhào)标簽溫度貯存；有效期一(yī)年(nián)。
● 産品簡介：
本公司提供的非變性凝膠蛋白(bái)電(diàn)泳試劑盒包含非變性電(diàn)泳所需的全部試劑，用戶隻需自(zì)備蛋白(bái)電(diàn)泳設備。試劑盒配套有預制膠，不需要自(zì)己制備凝膠，方便使用。另外，試劑盒提供蛋白(bái)上(shàng)樣緩沖液，電(diàn)泳緩沖液以及染色液，可以方便完成蛋白(bái)樣品從(cóng)上(shàng)樣到(dào)最後染色的全部過程。
試劑盒配套的預制膠為(wèi)梯度凝膠，濃度為(wèi)4-15%，可以有效分離30-1000 kD蛋白(bái)。
本試劑盒可以進行10次非變性電(diàn)泳。配套的預制膠厚度為(wèi)1.1 mm，12齒，每個(gè)泳道可以上(shàng)樣最大30 μl樣品。
特别說明：由于本系統采用非連續Laemmli凝膠系統（Tris-Glycine系統），電(diàn)泳凝膠系統pH在8.3-8.8，因此要求待分離的蛋白(bái)等電(diàn)點pI≤8.0（酸性蛋白(bái)），這樣蛋白(bái)在凝膠系統内帶負電(diàn)荷，pI越低(dī)于8.0，帶更多(duō)的負電(diàn)荷，在凝膠電(diàn)泳中才能(néng)正常向正極泳動。如果待分離的蛋白(bái)等電(diàn)點pI＞8.0（堿性蛋白(bái)），請選擇堿性電(diàn)泳凝膠系統分離（貨号RTD6131）。
● 使用說明：
1. 樣品制備：
該試劑盒不含樣品制備的相(xiàng)關試劑，請根據參考文獻自(zì)行制備非變性蛋白(bái)樣品。
注：非變性樣品制備中注意不用使用任何變性劑如SDS，LDS以及還(hái)原型如DTT，BME，TCEP等，以防止蛋白(bái)變性。非變性樣品的電(diàn)泳對鹽離子濃度高(gāo)度敏感，樣品電(diàn)泳時盡量把鹽離子濃度控制在100 mM以内，過高(gāo)的鹽離子濃度導緻電(diàn)泳拖尾，條帶不能(néng)有效分離。
2. 電(diàn)泳：
2.1 拆開(kāi)預制膠包裝，将預制膠安裝在合适的電(diàn)泳槽中。
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能(néng)VE-180，六一(yī)24K系列電(diàn)泳槽請确保密封條的安裝方向（下(xià)圖）。
六一(yī)其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電(diàn)泳槽可以直接使用預制膠。
不兼容Thermol系列電(diàn)泳槽。
2.2 準備電(diàn)泳緩沖液：
将5×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液（粉末型）溶于1 L超純水(shuǐ)中，徹底溶解，測定pH應為(wèi)8.3-8.5左右，不要調節pH。用前稀釋5倍即配成1×即用型Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液。
2.3準備上(shàng)樣樣品：
|
總體積
|
10
μl
|
|
蛋白(bái)樣品
|
x μl
|
|
5×非變性非還(hái)原蛋白(bái)上(shàng)樣緩沖液
|
2 μl
|
|
超純水(shuǐ)
|
補至10 μl
|
|
|
不要加熱
|
2.4電(diàn)泳過程；
在電(diàn)泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液(讓電(diàn)泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次；随後在電(diàn)泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液。上(shàng)樣，電(diàn)泳。
|
Native-PAGE電(diàn)泳
|
|
恒電(diàn)壓
|
起始電(diàn)流
|
結束電(diàn)流
|
電(diàn)泳時間
|
|
150V
|
/闆膠
|
/闆膠
|
min
|
|
注：冰浴電(diàn)泳（可選）
|
3. 染色：
3.1 将電(diàn)泳後的PAGE膠取下(xià)放(fàng)入塑料容器(qì)中，加入适量FastBlue蛋白(bái)染色液（以剛剛覆蓋過膠面為(wèi)适），搖床常溫搖動，條帶5-10分鍾即可見(jiàn)（蛋白(bái)含量高(gāo)于1
μg條帶）。
3.2 搖床常溫繼續搖動15-30分鍾至條帶清晰可見(jiàn)。
3.3 加入适量蒸餾水(shuǐ)脫色，期間更換1-2次蒸餾水(shuǐ)，搖床常溫搖動10-15分鍾至背景幹淨。
3.4 觀察保存結果。
4. 轉膜：
5. 實驗示例:
RTD6117-0415 4-15% RealPAGE Precast Gel
150V 35-11mA 67min
1×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液
FastBlue蛋白(bái)快速染色染色15分鍾