非變性PAGE凝膠制備及電(diàn)泳試劑盒（貨号:RTD6130）

Native PAGE Gel Preparation and Electrophoresis Kit

● 産品組成：

● 産品簡介：

本公司提供的非變性PAGE凝膠制備及電(diàn)泳試劑盒包含凝膠制備及電(diàn)泳所需的全部試劑，用戶隻需自(zì)備制膠器(qì)具和蒸餾水(shuǐ)。本試劑盒可用于配制非變性(native)PAGE凝膠。本試劑盒可配制30-50塊常規大小(xiǎo)的非變性PAGE膠。

特别說明：由于本系統采用非連續Laemmli凝膠系統，分離膠pH為(wèi)8.8，因此要求待分離的蛋白(bái)等電(diàn)點pI≤7.0，這樣蛋白(bái)在凝膠系統内帶負電(diàn)荷，在凝膠電(diàn)泳中才能(néng)正常向正極泳動。如果待分離的蛋白(bái)等電(diàn)點pI＞7.0，請選擇堿性電(diàn)泳凝膠系統分離（貨号RTD6131）。

● 使用說明：

一(yī) 配制分離膠（各試劑使用量請參考表二）

根據目的蛋白(bái)的分子量大小(xiǎo)選擇合适的凝膠濃度（表一(yī)），再按照(zhào)下(xià)面的分離膠配方表（表二）配制非變性PAGE的分離膠(即下(xià)層膠)。

表一(yī) 不同濃度的PAGE分離膠的最佳分離範圍：

10% APS配制-5 ml：

将0.5 gAPS幹粉溶于5 ml滅菌水(shuǐ)中，徹底溶解後分裝，1 ml/支，-20℃備存，每次取一(yī)管使用。10% APS應盡量減少室溫存放(fàng)時間，以防失效。10%APS在4℃有效期為(wèi)一(yī)周，-20℃有效期6個(gè)月(yuè)。若發現凝膠聚合時間延長(cháng)，應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

制備分離膠步驟：

1．根據下(xià)表，将不同體積的成分在小(xiǎo)燒杯或試管中混合；先後加入TEMED和10%APS，輕輕攪拌使其混勻，避免産生(shēng)氣泡

2．在凝膠模具中灌入适量分離膠溶液（對于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃闆頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然後在分離膠溶液上(shàng)輕輕覆蓋一(yī)層1-5 cm的水(shuǐ)層，使凝膠表面保持平整。

3．靜(jìng)置15-20分鍾，待分離膠和水(shuǐ)層之間出現一(yī)個(gè)清晰的界面後，說明凝膠已聚合。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。

1．去除覆蓋在分離膠上(shàng)的水(shuǐ)層。

2．按照(zhào)表一(yī)将不同成分在一(yī)個(gè)小(xiǎo)燒杯或試管中混合；先後加入TEMED和10%過硫酸铵，輕輕攪拌使其混勻，避免産生(shēng)氣泡。

3．将濃縮膠溶液加至分離膠的上(shàng)面，直至凝膠溶液到(dào)達前玻璃闆的頂端。

4．将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。

5．靜(jìng)置30-60分鍾，等待濃縮膠聚合。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。

三 電(diàn)泳：

凝膠凝固好後，根據以下(xià)配方準備電(diàn)泳緩沖液。

5×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液（不含SDS）的配制-1 L：将一(yī)包5×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液幹粉全部倒入1L燒杯中，加入約900 ml水(shuǐ)徹底溶解，用水(shuǐ)定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液（此溶液不用調節pH值）。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液。

在電(diàn)泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液(讓電(diàn)泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，随後在電(diàn)泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸電(diàn)泳緩沖液。上(shàng)樣，電(diàn)泳，一(yī)般是濃縮膠80V，分離膠120V恒壓，等指示前沿溴酚蘭電(diàn)泳到(dào)分離膠下(xià)緣後，結束電(diàn)泳，染色或者進行下(xià)一(yī)步實驗。

實驗示例