ECL發光(guāng)Marker
II(22-154 kD)
●産品編号及規格:
RTD6129 20T(100μl)
● 儲存條件(jiàn):
-20℃保存,開(kāi)封後有效期12個(gè)月(yuè)
● 産品簡介:
ECL發光(guāng)Marker是一(yī)種新型可視的 Western Blot(蛋白(bái)免疫印迹法)蛋白(bái)标準,可在同一(yī)膜上(shàng)實現與目的蛋白(bái)同時顯示,而無需任何附加步驟和額外的試劑。該産品由8 種高(gāo)純度的重組蛋白(bái)和2 種預染重組蛋白(bái)組成,指示的蛋白(bái)質分子量大小(xiǎo)為(wèi)12-154 kD(~12、22、28、38、50、62、~70、78、113、154
kD),其中~70 kD 為(wèi)橙紅(hóng)色預染條帶,~12 kD 為(wèi)藍色預染條帶,方便動态觀察蛋白(bái)質電(diàn)泳狀态或判斷蛋白(bái)質轉膜效果。22、28、38、50、62、78、113、154
kD 等8 種重組蛋白(bái)可以結合幾乎所有類型抗體,可與目的蛋白(bái)質同時結合抗體并經ECL顯色。該産品為(wèi)即用型,冰浴融解後即可使用。
● 使用說明:
1.ECL發光(guāng)Marker徹底溶解後,混勻上(shàng)樣(3-5 μl);
注a:對于使用一(yī)抗為(wèi)鼠源抗體建議取本産品5 μl進行蛋白(bái)電(diàn)泳;對于使用一(yī)抗為(wèi)兔源抗體可以降低(dī)上(shàng)樣量至3 μl;建議初次使用本産品時可以根據自(zì)身的實驗條件(jiàn)和實驗習慣通(tōng)過預實驗确定合适的上(shàng)樣量,以獲得效果更佳的實驗圖片;
注b:Marker為(wèi)即用型,不能(néng)100℃加熱處理,否則會(huì)導緻蛋白(bái)條帶發生(shēng)降解或失去效果
2.待測蛋白(bái)樣品上(shàng)樣;
3.常規聚丙烯酰胺凝膠電(diàn)泳;
4.參照(zhào)具體儀器(qì)說明,将蛋白(bái)轉移至合适的膜上(shàng);
5.參照(zhào)目的蛋白(bái)抗體說明書,進行膜封閉、一(yī)抗孵育、二抗孵育及相(xiàng)應的膜洗滌;
6.化學發光(guāng)檢測,具體方法參照(zhào)相(xiàng)關産品說明。
● 問題及解決:
ECL發光(guāng) Marker 的使用規範及其使用範圍請詳細閱讀(dú)上(shàng)文,下(xià)表列出了實驗中可能(néng)出現的問題及相(xiàng)應的解決方法,敬請參考:
問題
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原因
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解決方法
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條帶弱或者沒有條帶
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上(shàng)樣量偏少
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加大上(shàng)樣量
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轉膜不充分
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參照(zhào)儀器(qì)使用說明書,優化轉膜條件(jiàn),或使用蛋白(bái)預染 Maker判斷轉膜效果
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檢測系統所用試劑失效
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确認使用的檢測試劑正常工(gōng)作,優化一(yī)抗、二抗及檢測底物(wù)的反應條件(jiàn)(濃度、溫度、時間)
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抗體沒有有效結合 ECL發光(guāng) Marker
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不同來源的抗體及其亞型與 ECL發光(guāng) Marker的結合效果差異明顯,請根據實驗具體情況加以選擇
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條帶過亮呈彌散狀,甚至無法區分條帶
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ECL發光(guāng) Marker上(shàng)樣量偏多(duō)
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減少上(shàng)樣量
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抗體濃度過高(gāo)
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降低(dī)一(yī)抗、二抗使用濃度,優化抗體反應條件(jiàn)
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