SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
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貨号
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名稱
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規格
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RTD6123
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SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
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50次
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● 産品組成：
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貨号
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名稱
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規格
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保存條件(jiàn)
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AC2913-01
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30%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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TS0588-01
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1M Tris-HCl pH8.8
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100 ml
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RT
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TS0568-15ml
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1M Tris-HCl pH6.8
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15 ml
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RT
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SD050-5ml
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10% SDS
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5 ml
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RT
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AP020P
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10% APS（幹粉）
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5 ml
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RT 配制後-20℃貯存
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TA0761-01
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TEMED
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0.5 ml
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4℃，避光(guāng)
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說明書
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一(yī)份
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● 産品簡介：
本公司提供的SDS-PAGE凝膠制備試劑盒包含凝膠制備所需的全部試劑，用戶隻需自(zì)備制膠器(qì)具和蒸餾水(shuǐ)。本試劑盒不僅可用于配制SDS-PAGE凝膠，也可用于配制非變性(Native)PAGE凝膠。本試劑盒可配制至少30-50塊常規大小(xiǎo)的PAGE膠。
● 貯存、運輸及效期：
按照(zhào)标簽溫度貯存；常溫運輸；有效期一(yī)年(nián)。
● 使用說明：
一(yī) 配制分離膠：
根據目的蛋白(bái)的分子量大小(xiǎo)選擇合适的凝膠濃度（表一(yī)）。
表一(yī) 不同濃度的SDS-PAGE分離膠的最佳分離範圍：
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SDS-PAGE分離膠濃度
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最佳分離範圍
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6%
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50-350kD
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8%
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35-300kD
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10%
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20-150kD
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12%
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15-100kD
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15%
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10-80kD
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配制分離膠前，根據以下(xià)配方準備10% APS：
10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS幹粉溶于5 ml滅菌水(shuǐ)中，徹底溶解後分裝，1 ml/支，-20℃備存，每次取一(yī)管使用。10% APS應盡量減少室溫存放(fàng)時間，以防失效。10%APS在4℃有效期為(wèi)一(yī)周，-20℃有效期6個(gè)月(yuè)。若發現凝膠聚合時間延長(cháng)，應考慮更換使用-20度保存的10% APS。
制備分離膠步驟：
1．參照(zhào)凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。
2．根據表二，将不同體積的成分在小(xiǎo)燒杯或試管中混合；先後加入TEMED和10%APS，輕輕攪拌使其混勻，避免産生(shēng)氣泡。
3．在凝膠模具中灌入适量分離膠溶液（對于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃闆頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然後在分離膠溶液上(shàng)輕輕覆蓋一(yī)層1-5
cm的水(shuǐ)層，使凝膠表面保持平整。
4．靜(jìng)置15-20分鍾，待分離膠和水(shuǐ)層之間出現一(yī)個(gè)清晰的界面後，說明凝膠已聚合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。
表二 SDS-PAGE分離膠配方表
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組份
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不同凝膠體積對應各組份的取樣量（ml）
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6％ 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
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H2O
|
2.05
|
4.1
|
6.15
|
8.2
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
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30％ PAA（29:1）
|
1
|
2
|
3
|
4
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
8％ 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1.7
|
3.3
|
5
|
6.7
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
1.3
|
2.7
|
4
|
5.3
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
10％ 膠
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1.3
|
2.7
|
4
|
5.3
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
1.7
|
3.3
|
5
|
6.7
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
12％ 膠
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1
|
2
|
3
|
4
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
2
|
4
|
6
|
8
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.003
|
0.006
|
0.009
|
0.012
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
15％ 膠
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
0.5
|
1
|
1.5
|
2
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
2.5
|
5
|
7.5
|
10
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.003
|
0.006
|
0.009
|
0.012
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
注：如果配制非變性膠，參考上(shàng)述配方，不加10% SDS即可配制成非變性PAGE膠。
二 濃縮膠制備：
1．去除覆蓋在分離膠上(shàng)的水(shuǐ)層。
2．按照(zhào)表三将不同成分在一(yī)個(gè)小(xiǎo)燒杯或試管中混合；先後加入TEMED和10%過硫酸铵，輕輕攪拌使其混勻，避免産生(shēng)氣泡。
3．将濃縮膠溶液加至分離膠的上(shàng)面，直至凝膠溶液到(dào)達前玻璃闆的頂端。
4．将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。
5．靜(jìng)置30-60分鍾，等待濃縮膠聚合。
注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據環境溫度的不同調節APS的加入量。
表三 SDS-PAGE濃縮膠(5%)配方表
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組份
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不同凝膠體積對應各組份的取樣量（ml）
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2
ml
|
4
ml
|
6
ml
|
10
ml
|
|
H2O
|
1.4
|
2.7
|
4.1
|
6.8
|
|
1M Tris-HCl pH6.8
|
0.25
|
0.5
|
0.75
|
1.25
|
|
30％ PAA（29:1）
|
0.33
|
0.67
|
1
|
1.7
|
|
10% SDS
|
0.02
|
0.04
|
0.06
|
0.1
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.01
|
|
10％ APS
|
0.02
|
0.04
|
0.06
|
0.1
|