Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電(diàn)泳試劑盒                    說明書Ver 740468

● 産品組成：

● 産品簡介：

該産品含有多(duō)肽電(diàn)泳全套試劑，可以用來檢測1-20 kd的多(duō)肽大小(xiǎo)。本試劑盒可配制至少25塊常規大小(xiǎo)（8×10cm）,厚度1 mm的PAGE膠。該産品具有以下(xià)特點：

1 适用範圍廣：制膠緩沖溶液中不含有SDS，适用于多(duō)肽的變性和非變性電(diàn)泳。

2 分辨率高(gāo)：凝膠緩沖液獨特配方，可以有效分離1-5 kD多(duō)肽。

3 使用方便：配制凝膠時隻需1:1混合濃縮膠或分離膠溶液，不用計算(suàn)；紅(hóng)色濃縮膠，易于觀察加樣孔，上(shàng)樣方便。

4 綠色環保：不用單獨添加有刺激性氣味的催化劑如TEMED。

● 貯存、運輸及效期：

按照(zhào)标簽溫度貯存；常溫運輸；有效期一(yī)年(nián)。

● 使用說明：

一(yī). 凝膠促凝劑配制：

改良型凝膠促凝劑為(wèi)固體粉末，使用前加入5 ml雙蒸水(shuǐ)溶解即配制成10% 凝膠促凝劑溶液，将溶液分裝後置于-20℃保存，通(tōng)常一(yī)年(nián)内有效。該溶液在4℃條件(jiàn)下(xià)可以穩定保存兩周。若發現凝膠聚合時間延長(cháng)，應考慮更換使用-20℃保存的10% 凝膠促凝劑溶液。

二. 制膠：

1. 配制分離膠:

1.1按照(zhào)表一(yī)将不同體積的成分加入到(dào)小(xiǎo)燒杯中混合；立即混勻5-10秒(miǎo)，以使溶液充分混勻。                    表1 （一(yī)塊1 mm mini膠用量）*

注： * 如非必須，不要使用厚度1.5 mm的凝膠，盡量使用厚度0.75 mm和1 mm的凝膠，這樣會(huì)減少電(diàn)泳後染色和脫色的時間。

1.2 在玻璃闆中迅速灌入适量分離膠溶液，使液面和短玻璃闆上(shàng)沿之間的距離比梳齒長(cháng)0.5 cm即可。注：此溶液為(wèi)過量，請勿全部注入。

1.3 然後在分離膠溶液上(shàng)輕輕覆蓋一(yī)層1-2 cm的無水(shuǐ)乙醇層，使凝膠表面保持平整。

1.4 靜(jìng)置10-20分鍾，待分離膠和乙醇層之間出現一(yī)個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據表1的标準條件(jiàn)調節促凝劑的加入量。分離膠25℃條件(jiàn)下(xià)，約20分鍾可以聚合。

2. 配制濃縮膠:

去除覆蓋在分離膠上(shàng)的乙醇層，用濾紙(zhǐ)将殘留的乙醇吸去。

2.1 按照(zhào)表一(yī)将不同成分加入到(dào)小(xiǎo)燒杯中混合；立即混勻5-10秒(miǎo)，以使溶液充分混勻。

2.2 将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。

2.3 靜(jìng)置30-40分鍾待凝膠聚合。

注：凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據表1的标準條件(jiàn)調節促凝劑的加入量。濃縮膠25℃條件(jiàn)下(xià)，約40分鍾可以聚合。

三. 電(diàn)泳：

3.1 變性電(diàn)泳：

3.1.1 10×Tris-Tricine- SDS緩沖液配制：

将10×Tris-Tricine -SDS緩沖液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一(yī)幹淨的燒杯中，加入500 ml超純水(shuǐ)，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500ml 10×TTS緩沖液。超純水(shuǐ)稀釋10倍配成1×Tris-Tricine -SDS緩沖液。

注：伯樂Mini III電(diàn)泳槽一(yī)次電(diàn)泳使用300-350 ml 1×TTS緩沖液。

3.1.2 樣品處理：

        待上(shàng)樣的檢測樣品與2×Tricine上(shàng)樣緩沖液（變性，還(hái)原）[Cat No：TP050]等體積混合，95℃處理5分鍾後上(shàng)樣。蛋白(bái)Marker一(yī)般已經含有上(shàng)樣緩沖液，根據說明書上(shàng)樣（預染Marker不能(néng)加熱處理，非預染Marker上(shàng)樣前一(yī)般要75℃處理5-10分鍾）。

3.2 非變性電(diàn)泳：

3.2.1 10×Tris-Tricine緩沖液配制：

将10×Tris-Tricine緩沖液（10×TT）粉末[Cat No:CB020P]（試劑盒不提供）置于一(yī)幹淨的燒杯中，加入500 ml超純水(shuǐ)，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500 ml 10×TT緩沖液。超純水(shuǐ)稀釋10倍配成1×Tris-Tricine緩沖液。

注：伯樂Mini III電(diàn)泳槽一(yī)次電(diàn)泳使用300-350 ml 1×TT緩沖液。

3.2.2 樣品處理：

      待上(shàng)樣的檢測樣品與2×Tricine上(shàng)樣緩沖液（非變性，非還(hái)原）[Cat No:TP070] （試劑盒不提供）等體積混合，不要加熱，直接上(shàng)樣。

3.3 電(diàn)泳：

将電(diàn)泳槽的内槽加滿電(diàn)泳緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器(qì)将梳孔吹洗幹淨，将Marker或蛋白(bái)樣品加入點樣孔，穩壓電(diàn)泳（表2），至藍色指示前沿至分離膠下(xià)沿位置時即可停止電(diàn)泳。整個(gè)電(diàn)泳過程大約需要2.5-3個(gè)小(xiǎo)時。

表2 多(duō)肽電(diàn)泳條件(jiàn)

 實驗示例：