超低(dī)分子量蛋白(bái)電(diàn)泳試劑盒（非變性）（貨号：RTD6121）
● 産品組成：
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組分貨号
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組分
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名稱
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規格
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貯存
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運輸
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RTD6121-01
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組分1
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2×多(duō)肽電(diàn)泳濃縮膠緩沖液
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15 ml
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4℃
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常溫
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RTD6121-02
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組分2
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2×多(duō)肽電(diàn)泳分離膠緩沖液
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30 ml
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4℃
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常溫
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RTD6121-03
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組分3
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2×PAA溶液 超低(dī)濃縮膠用
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15 ml
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4℃
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常溫
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RTD6121-04
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組分4
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2×PAA溶液 超低(dī)分離膠用
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30 ml
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4℃
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常溫
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AP020P
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組分5
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10% APS（幹粉）
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5 ml
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常溫
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常溫
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TA0761-01
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組分6
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TEMED
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0.5 ml
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常溫
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常溫
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CB020P
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組分7
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10×Tris-Tricine電(diàn)泳緩沖液 (10×TT)
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500 ml（幹粉）
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常溫
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常溫
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TP070
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組分8
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2×Tricine 上(shàng)樣緩沖液（非變性，非還(hái)原）
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1 ml
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-20℃
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常溫
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RTD6202-02
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組分9
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FastBlue蛋白(bái)染色液
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500 ml
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常溫
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常溫
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● 産品簡介：
本試劑盒含有超低(dī)分子量蛋白(bái)電(diàn)泳（多(duō)肽電(diàn)泳）全套試劑，可以用來檢測非變性條件(jiàn)下(xià)1-20 kd的多(duō)肽大小(xiǎo)。本試劑盒可配制至少10塊常規大小(xiǎo)的PAGE膠（8×10cm）。具有以下(xià)特點：
1 配套試劑不含任何變性劑如SDS和還(hái)原劑如DTT或巯基乙醇，适用于非變性電(diàn)泳。
注：凝膠和電(diàn)泳緩沖液pH在8.3左右，非變性電(diàn)泳适于檢測等電(diàn)點小(xiǎo)于8.3的蛋白(bái)，等電(diàn)點近似或大于8.3的堿性蛋白(bái)不适合檢測。
2 分辨率高(gāo)：凝膠緩沖液獨特配方，可以有效分離1-5 kD多(duō)肽。
3 使用方便：配制凝膠時隻需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液，加上(shàng)APS和TEMED即可配制凝膠。
● 貯存和效期：
按照(zhào)标簽溫度貯存；開(kāi)封後有效期一(yī)年(nián)。
● 使用說明：
一(yī). 10% APS配制：
10% APS配制-5 ml：将APS幹粉溶于5 ml滅菌水(shuǐ)中，徹底溶解後分裝，1 ml/支，-20℃備存，每次取一(yī)管使用。10% APS應盡量減少常溫存放(fàng)時間，以防失效。10%APS在4℃有效期為(wèi)一(yī)周，-20℃有效期6個(gè)月(yuè)。若發現凝膠聚合時間延長(cháng)，應考慮更換使用-20度保存的10% APS。
二. 制膠：
I 配制分離膠
1．按照(zhào)表一(yī)将不同體積的成分加入到(dào)小(xiǎo)燒杯或離心管中混合；立即混勻5-10秒(miǎo)，以使溶液充分混勻。
表一(yī) （一(yī)塊1 mm mini膠用量）*
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分離膠
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濃縮膠
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18％T /5 ml
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5％T /2 ml
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2×多(duō)肽電(diàn)泳濃縮膠緩沖液
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/
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1 ml
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2×多(duō)肽電(diàn)泳分離膠緩沖液
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2.5 ml
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/
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2×PAA溶液 超低(dī)濃縮膠用
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/
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1 ml
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2×PAA溶液 超低(dī)分離膠用
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2.5 ml
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/
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10％APS
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25-50 μl**
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20-30 μl
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TEMED
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2.5-5 μl
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2 μl
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注： * 如非必須，不要使用厚度1.5mm的凝膠，盡量使用厚度0.75m和1mm的凝膠，這樣會(huì)減少電(diàn)泳後染色和脫色的時間。
** 凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高(gāo)時，聚合較快；冬天氣溫低(dī)時，聚合時間會(huì)延長(cháng)。可以根據表二的标準條件(jiàn)調節催化劑的加入量。
表二 凝膠制備凝固時間表
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環境溫度
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20℃
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25℃
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分離膠配制
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濃縮膠配制
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分離膠配制
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濃縮膠配制
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分離膠配制量
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5 ml
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-
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5 ml
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-
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濃縮膠配制量
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-
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2 ml
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-
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2 ml
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10%APS
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50 μl
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20 μl
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25 μl
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20 μl
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TEMED
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5 μl
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2 μl
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2.5 μl
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2 μl
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凝固時間
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5-10 分鍾
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20-30 分鍾
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5-10 分鍾
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20-30 分鍾
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2．在凝膠模具中迅速灌入适量分離膠溶液，然後在分離膠溶液上(shàng)輕輕覆蓋一(yī)層1-3 cm的無水(shuǐ)乙醇層，使凝膠表面保持平整。
3．靜(jìng)置5-10分鍾，待分離膠和乙醇層之間出現一(yī)個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
II 配制濃縮膠
去除覆蓋在分離膠上(shàng)的乙醇層，用濾紙(zhǐ)将殘留的乙醇吸去。
1．按照(zhào)表一(yī)将不同成分加入到(dào)小(xiǎo)燒杯或離心管中混合；立即混勻5-10秒(miǎo)，以使溶液充分混勻。
2．将梳子插入凝膠内，避免産生(shēng)氣泡。
3．靜(jìng)置20-30分鍾待凝膠聚合
三. 電(diàn)泳：
1. 10×Tris-Tricine緩沖液配制：
将10×Tris-Tricine緩沖液（10×TT）粉末（Cat No：CB020P）置于一(yī)幹淨的一(yī)升燒杯中，加入500ml超純水(shuǐ)，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500ml 10×TT緩沖液。
表三 1×TT緩沖液配制
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1×TT配制量 500 ml
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1×TT配制量 1000 ml
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10×TT
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50 ml
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100 ml
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超純水(shuǐ)
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450 ml
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900 ml
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注：伯樂Mini
III電(diàn)泳槽一(yī)次電(diàn)泳使用500ml 1×TT緩沖液。
2. 樣品處理：
待上(shàng)樣的檢測樣品與2×Tricine上(shàng)樣緩沖液（非變性，非還(hái)原）[Cat No：TP070]等體積混合，不要加熱，上(shàng)樣。蛋白(bái)Marker選擇非變性專用Marker，根據說明書使用。将電(diàn)泳槽的内槽加滿1×TT緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器(qì)将梳孔吹洗幹淨，将Marker或蛋白(bái)樣品（已經過處理）加入點樣孔，穩壓電(diàn)泳（表四），至藍色指示前沿至分離膠下(xià)沿位置時即可停止電(diàn)泳。整個(gè)電(diàn)泳過程大約需要2.5-3個(gè)小(xiǎo)時。
表四 多(duō)肽電(diàn)泳條件(jiàn)
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恒電(diàn)壓
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150V
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起始電(diàn)流
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60-75mA/闆膠
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結束電(diàn)流
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15-25mA/闆膠
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電(diàn)泳時間
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2.5-3小(xiǎo)時
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四. 染色（使用組分9-FastBlue蛋白(bái)染色液）：
4.1 将電(diàn)泳後的PAGE膠取下(xià)放(fàng)入塑料容器(qì)中，蒸餾水(shuǐ)漂洗一(yī)次；棄水(shuǐ)，加入适量染色液（以剛
剛覆蓋過膠面為(wèi)适），條帶1-2分鍾即可見(jiàn)。
4.2 搖床上(shàng)常溫搖動10-15分鍾至條帶清晰；觀察結果。