Real Taq DNA Polymerase
● 儲存條件(jiàn):-20℃ 保存
● 濃 度: 5 U/ml
● 産品簡介
Real Taq
DNA Polymerase是從(cóng)克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大腸杆菌經誘導表達後分離純化的，其分子量為(wèi)94 KD。具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，無3’-5’外切酶活性。在PCR反應中，Real Taq DNA Polymerase延伸速度為(wèi)1-2 kb/分鍾，産物(wù)3’端帶A，可直接用TA載體克隆。
● 活性定義
1單位(U) Real Taq DNA Polymerase活力定義為(wèi)在74℃、30分鍾内，以活性化的大馬哈魚精子DNA作為(wèi)模闆/引物(wù)，将10 nmol脫氧核苷酸摻入到(dào)酸不溶物(wù)質所需的酶量。
● 酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;100 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol
● 10×Taq Buffer
200
mM Tris-HCl (pH 8.4);200
mMKCl;15 mMMgCl2; 其它成分。
● 适用範圍
一(yī)般用于DNA片段的PCR擴增、DNA标記、引物(wù)延伸、序列測定、平末端加A等，産物(wù)可以直接用于T/A載體克隆。
● 反應舉例：
注意：以下(xià)舉例為(wèi)常規PCR反應系統，僅供參考。實際反應條件(jiàn)因模闆、引物(wù)等的結構不同而各異，需根據模闆、目的片段的大小(xiǎo)、堿基序列和引物(wù)長(cháng)短等具體情況，設定最佳反應條件(jiàn)。
以人基因組DNA為(wèi)模闆，擴增1 kb的片段
1. 反應體系的建立：50 ml反應體系如下(xià)(可根據比例放(fàng)大或縮小(xiǎo)反應體系)：
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Template
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<1mg
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Primer
1（10 mM）
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1 ml
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Primer
2（10 mM）
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1 ml
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10×Taq Buffer
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5 ml
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dNTP
Mixture(10 mM)
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1 ml
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Taq
(5 U/ml)
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0.5 ml
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ddH2O
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補至 50 ml
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2. PCR反應循環的設置：
94℃ 3 min
94℃ 30 sec
55℃ 30 sec 30
cycles
72℃ 1 min
72℃ 5 min
3. 結果檢測：反應結束後取5 ml反應産物(wù)，瓊脂糖凝膠電(diàn)泳檢測。