半幹轉轉印對濾紙(zhǐ)要求較高(gāo),要用超厚濾紙(zhǐ),如伯樂厚度2.4mm濾紙(zhǐ)(伯樂貨号:1703965)。或者選擇半幹轉轉印濾布(貨号:SP1010)
5×RealBlot快速半幹轉轉膜緩沖液
5×RealBlot Rapid Semi-Dry Transfer buffer Ver740158
● 産品組成:
貨号
|
名稱
|
規格
|
RT5030
|
5×RealBlot快速半幹轉轉膜緩沖液
|
500 ml
|
|
說明書
|
一(yī)份
|
● 産品簡介:
5×RealBlot快速半幹轉轉膜緩沖液使用獨特配方,使用半幹轉法(Semi-dry blot)方法,能(néng)在10-15分鍾内高(gāo)效快速地将蛋白(bái)轉移到(dào)印迹膜(PVDF膜或NC膜)上(shàng)。
特點:
環境友(yǒu)好:快速轉膜液不使用甲醇,減輕了對實驗者和環境的傷害。
兼容性好:快速轉膜液能(néng)兼容Laemmli膠,預制膠,Bis-Tris膠等多(duō)種凝膠。
節省時間:快速轉膜液能(néng)在10-15分鍾内完成蛋白(bái)的轉印。
以每次轉印使用100 ml 1×RealBlot快速半幹轉轉膜緩沖液計算(suàn),該産品可以使用25次。
● 貯存及運輸:
4-8℃貯存;有效期一(yī)年(nián);常溫運輸。
● 使用說明:
轉膜前的準備:
2張半幹轉專用超厚濾紙(zhǐ)(厚度2.4 mm)或者半幹轉轉印濾布(貨号:SP1010);裁好的轉印膜;足夠的1×RealBlot快速半幹轉轉膜緩沖液;無水(shuǐ)甲醇(處理PVDF膜用)
1 按照(zhào)下(xià)表配制1×RealBlot快速半幹轉轉膜緩沖液:
加入順序
|
|
1×快速轉膜液配制量 200ml
|
1
|
5×快速轉膜液
|
40 ml
|
2
|
超純水(shuǐ)
|
120 ml
|
3
|
無水(shuǐ)乙醇
|
40 ml
|
注:按照(zhào)順序加入各種溶液。如果加入轉膜液後沒有用水(shuǐ)沖洗稱量容器(qì),加入乙醇會(huì)産生(shēng)沉澱。
2 将濾紙(zhǐ)或濾布浸泡在1×快速轉膜液中,完全浸濕3-5分鍾。
3 PVDF膜使用前要用無水(shuǐ)甲醇潤濕30秒(miǎo),浸泡在1×快速轉膜液中,平衡5分鍾。NC膜無需處理,直接浸泡在轉膜緩沖液中。
4 将凝膠在超純水(shuǐ)中浸泡漂洗2分鍾,去除膠表面的SDS。
1 負極(陰極)
2一(yī)張超厚濾紙(zhǐ)或四層濾布
3 凝膠
4 轉印膜
5一(yī)張超厚濾紙(zhǐ)或四層濾布
6 正極(陽極)
6 用滾輪趕出氣泡。
7 半幹轉推薦使用恒流轉移:
分子量範圍和凝膠厚度
|
一(yī)塊小(xiǎo)型膠(7.3×8.5 cm)
|
兩塊小(xiǎo)型膠(7.3×8.5 cm)
或一(yī)塊中型膠(8.5×13.5 cm)
|
1.5 mm厚度凝膠
|
下(xià)列條件(jiàn)基礎上(shàng)增加2分鍾
|
下(xià)列條件(jiàn)基礎上(shàng)增加2分鍾
|
高(gāo)分子量
|
大于130 kD
|
恒流1.3 A,15分鍾
|
恒流2.5 A,15分鍾
|
混合分子量
|
5-130 kD
|
恒流1.3 A,10分鍾
|
恒流2.5 A,10分鍾
|
低(dī)分子量
|
小(xiǎo)于30 kD
|
恒流1.3 A,7分鍾
|
恒流2.5 A,7分鍾
|
注:不同廠家半幹轉儀器(qì)設置可能(néng)有所不同,請根據廠家說明書适當調整。