10×RealBlot 快速轉膜液

                 10×RealBlot Rapid Transfer buffer            

● 産品組成：

● 産品簡介：

快速轉膜液使用獨特配方，能(néng)高(gāo)效快速地将蛋白(bái)轉移到(dào)印迹膜（PVDF或硝纖膜）上(shàng)。使用濕轉法（Tank blot）或半幹轉法（Semi-dry blot）方法，能(néng)在10-40分鍾内完成轉膜過程。

快速和環保：快速轉膜液不使用甲醇，減輕了對實驗者和環境的傷害。

兼容性好：快速轉膜液能(néng)兼容Laemmli膠，預制膠，Bis-Tris膠等多(duō)種凝膠。

轉移效率高(gāo)：快速轉膜液對分子量跨度較大的蛋白(bái)也有很好的轉移效率，有效解決了大小(xiǎo)蛋白(bái)不能(néng)在同一(yī)張膜上(shàng)同時轉移的問題。

● 貯存及運輸：

  4-8℃貯存，有效期一(yī)年(nián)；常溫運輸。

● 使用說明：

轉膜前的準備：

6-10張裁好的普通(tōng)濾紙(zhǐ)或Whatman3MM濾紙(zhǐ)；裁好的轉印膜；足夠的1×快速轉移buffer；無水(shuǐ)甲醇（處理PVDF膜用）

一(yī) 濕轉法（Tank blot）：

1 按照(zhào)下(xià)表配制1×快速轉膜液

2 将濾紙(zhǐ)和海綿浸泡在1×快速轉膜液中，完全浸濕，平衡5分鍾。

3 PVDF膜使用前要用無水(shuǐ)甲醇潤濕30秒(miǎo)，随後浸泡在1×快速轉膜液中，完全浸濕，平衡5分鍾；NC膜無需處理，直接浸泡在轉膜緩沖液中。

4 将凝膠在超純水(shuǐ)中浸泡漂洗2分鍾，去除膠表面的SDS；随後将凝膠浸泡在1×快速轉膜液中。

注意：水(shuǐ)中漂洗時間一(yī)定不能(néng)超過2分鍾，否則分子量較大的蛋白(bái)不能(néng)完全轉移。

5 按照(zhào)以下(xià)順序做好轉印三明治結構：

1 負極（陰極）

2 一(yī)塊海綿

3 濾紙(zhǐ)（3張）

4 凝膠

5 轉印膜

6濾紙(zhǐ)（3張）

7 一(yī)塊海綿（根據三明治的厚度選擇是否使用）

8 正極（陽極）

注意：  ① 要徹底清除三明治結構中的氣泡，适當補加1×快速轉膜液保持三明治結構濕潤。

 ② 三明治結構的制作不能(néng)太緊，也不能(néng)太松。太緊和太松都會(huì)影響轉印效果。如果太緊的話，可以去除陽極一(yī)側的海綿。

6 将三明治結構放(fàng)于轉移槽中，轉印槽中灌滿1×快速轉膜液。

7 濕轉推薦使用恒流轉移：

二 半幹轉（Semi-dry blot）：

1 按照(zhào)下(xià)表配制1×快速轉膜液：

2 将濾紙(zhǐ)浸泡在1×快速轉膜液中，完全浸濕。

3 PVDF膜使用前要用無水(shuǐ)甲醇潤濕30秒(miǎo)，浸泡在1×快速轉膜液中，完全浸濕，平衡5分鍾。NC膜無需處理，直接浸泡在轉膜緩沖液中。

4 将凝膠在超純水(shuǐ)中浸泡漂洗2分鍾，去除膠表面的SDS；随後将凝膠浸泡在1×快速轉膜液中。

注意：水(shuǐ)中漂洗時間不能(néng)超過2分鍾，否則分子量較大的蛋白(bái)可能(néng)不能(néng)完全轉移。

5 按照(zhào)以下(xià)順序做好轉印三明治結構：

1 負極（陰極）

2 下(xià)層濾紙(zhǐ)（5張）

3 凝膠

4 轉印膜

5 上(shàng)層濾紙(zhǐ)（5張）

6 正極（陽極）

半幹轉時，濾紙(zhǐ)、膠、膜之間的大小(xiǎo)，一(yī)般是下(xià)層濾紙(zhǐ)>=膜>=膠>=上(shàng)層濾紙(zhǐ)。上(shàng)下(xià)兩層的濾紙(zhǐ)一(yī)定不能(néng)接觸；濾紙(zhǐ)、膠、膜之間千萬不能(néng)有氣泡，接觸的濾紙(zhǐ)和氣泡會(huì)造成短路(lù)。

6 半幹轉推薦使用恒流轉移：

注：不同廠家半幹轉儀器(qì)設置可能(néng)有所不同，請根據廠家說明書适當調整。

三 問題解決：

 實驗示例：