SDS裂解液

● 産品包裝：

● 産品簡介：

SDS裂解液(SDS Lysis Buffer)是一(yī)種比較強烈的細胞組織裂解液，其主要成分是Tris  (pH8.0)， SDS，EDTA等。SDS裂解液裂解得到(dào)的蛋白(bái)樣品可以用于常規的Western、ChIP(染色質免疫共沉澱，chromatin immunoprecipitation)等。由于SDS裂解液有較強的裂解能(néng)力，IP或Co-IP實驗不建議使用該裂解液。由于含有較高(gāo)濃度的SDS等幹擾物(wù)質，不能(néng)用傳統Bradford法測定由本裂解液裂解得到(dào)樣品的蛋白(bái)濃度，可以使用BCA蛋白(bái)濃度測定試劑盒（貨号：RTP7102）或Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒（去垢劑兼容型）（貨号：RTP7104）測定蛋白(bái)濃度。

● 貯存、效期及運輸：

常溫保存；有效期2年(nián)；常溫運輸。

● 注意事(shì)項：

1. 需自(zì)備蛋白(bái)酶抑制劑如PMSF。

2. 如果使用本SDS裂解液用于ChIP實驗，在對超聲後基因組DNA大小(xiǎo)進行檢測時，如果采用瓊脂糖凝膠中添加花菁素類染料如GelRed或類似染料或使用含該類染料的DNA上(shàng)樣緩沖液時，由于電(diàn)泳時SDS會(huì)與此類染料結合形成異常條帶，條帶通(tōng)常在600-1000 bp左右，因此會(huì)對超聲後基因組DNA大小(xiǎo)的判斷造成一(yī)定的影響。建議采用後染方法即“電(diàn)泳完畢後對瓊脂糖凝膠染色”的方式進行條帶大小(xiǎo)的檢測，使用該方法不會(huì)有異常條帶出現，不影響對超聲後基因組DNA大小(xiǎo)的判斷，而且條帶大小(xiǎo)更準确。

● 使用說明：

1.  準備SDS裂解液：

取适當量的裂解液，在使用前數分鍾内加入1/100體積的100 mM PMSF（貨号：PM1790），使PMSF的最終濃度為(wèi)1 mM或加入其他蛋白(bái)酶抑制劑。

注：SDS裂解液低(dī)溫會(huì)析出結晶，以下(xià)操作需保持常溫操作。

2. 細胞蛋白(bái)提取：

2.1 貼壁細胞：去除培養液，加入适量1×PBS，輕柔漂洗一(yī)遍，不要擾動貼壁細胞。按照(zhào)6孔闆每孔加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液，移液器(qì)吹打數下(xià)，使裂解液和細胞充分接觸，用細胞刮刀刮下(xià)細胞收集于1.5 ml離心管中。

2.2 懸浮細胞：450 g 4℃ 離心5 min收集細胞；用适量1×PBS重懸細胞，450 g 4℃ 離心5 min收集細胞；重複漂洗細胞一(yī)次；按照(zhào)細胞沉澱體積（PCM）20 μl加入200 μl 裂解液的比例加入SDS裂解液，混勻細胞沉澱。

注：2×10⁶ Jurkat細胞，其細胞沉澱體積（PCM，Packed Cell Volume）大約為(wèi)20 μl。

2.3 裂解細胞：

2.3.1 裂解混合物(wù)超聲波處理（超聲條件(jiàn)根據儀器(qì)調整）；如沒有超聲破碎儀，可以使用注射器(qì)用27G針頭處理裂解物(wù)10-15次（貨号：PE2719 ，蛋白(bái)提取針頭套裝），以徹底裂解細胞。

注：裂解中細胞會(huì)釋放(fàng)出變性的核酸，呈團狀粘稠透明樣，如不進行超聲或針頭裂解處理，會(huì)導緻裂解物(wù)非常粘稠，大大降低(dī)蛋白(bái)提取的得率和純度。

2.3.2 裂解物(wù)95℃處理10分鍾，間歇混勻。

2.4 離心收集上(shàng)清：

充分裂解後，常溫16000 g離心10分鍾，取上(shàng)清，即可進行後續的PAGE、Western等操作。

3. 組織蛋白(bái)提取：

3.1 手術(shù)切除的組織塊迅速置于預冷的生(shēng)理鹽水(shuǐ)中，漂洗數次，洗淨組織血迹，用濾紙(zhǐ)吸

幹組織表面液體，将組織切成細小(xiǎo)的碎片。

3.2 按照(zhào)每20 mg組織加入200 μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适當添加更多(duō)的裂解液，如果需要高(gāo)濃度的蛋白(bái)樣品，可以适當減少裂解液的用量。)

3.3 用玻璃勻漿器(qì)勻漿5-10次，收集勻漿後的裂解混合物(wù)，超聲波處理（超聲條件(jiàn)根據儀器(qì)調整）；如沒有超聲破碎儀，可以使用注射器(qì)用27G針頭處理裂解物(wù)10-15次（貨号：PE2719 ，蛋白(bái)提取針頭套裝），以徹底裂解細胞。

注：裂解中細胞會(huì)釋放(fàng)出變性的核酸，呈團狀粘稠透明樣，如不進行超聲或針頭裂解處理，會(huì)導緻裂解物(wù)非常粘稠，大大降低(dī)蛋白(bái)提取的得率和純度。

3.4 裂解物(wù)95℃處理10分鍾，間歇混勻。

3.5 常溫16000 g離心10分鍾，取上(shàng)清，即可進行後續的PAGE、Western等操作。

●  實驗示例：

4-18% RealPAGE 預制膠

電(diàn)泳條件(jiàn)：1×TGS 穩壓200V 38-13mA 50min;染色：FastBlue蛋白(bái)染色液染色30min。

樣品1（LD直裂）：2 ml K562細胞（6.5×106/ml），3000rpm 5min，沉澱用PBS清洗1次，離心後徹底去除PBS，加入130 μl超純水(shuǐ)，100 μl5×loading buffer(變性，還(hái)原)，95度10 min，上(shàng)樣5 μl。

樣品2（4K-BME）：1 ml 4K細菌細胞（O/N培養），13000  rpm 5min，離心後徹底去除殘餘液體，加入130 μl超純水(shuǐ)，100 μl 5×loading buffer，95度10min，上(shàng)樣7.5 μl。

樣品3：1 ml K562細胞（5×106/ml），3000 rpm 5 min，沉澱用PBS清洗1次，離心後徹底去除PBS，加入500 μl SDS裂解緩沖液，超聲處理（10%功率，開(kāi)5S，關10S，2min），冰浴10 min或95度10min，間歇混勻，13000 rpm低(dī)溫離心10 min，取上(shàng)清即為(wèi)總蛋白(bái)。加入5×loading buffer(變性,還(hái)原)調整樣品濃度為(wèi)2 μg/μl，95度5min，上(shàng)樣5，7.5和10 μl。