PPA，Plant Tissue Culture Preservative Agents  

PPA –植物(wù)組織培養抗菌保護劑

使用操作說明

産品名稱:PPA- Plant Tissue Culture Preservative Agents

（植物(wù)組織培養抗菌保護劑）

貨号：PPA001-50ml

保存條件(jiàn)：4℃

運輸條件(jiàn)：常溫運輸

性狀：無色至琥珀色透明液體

pH 值：3.8

有效期：見(jiàn)瓶身标簽說明

産品描述：

1.    PPA是一(yī)種熱穩定的抗菌劑，用于植物(wù)組織培養中植物(wù)的微生(shēng)物(wù)污染防治與清除；

2.   在合理的使用劑量下(xià)，PPA是一(yī)種非常有效的植物(wù)組培抗菌劑與保護劑，不會(huì)對植物(wù)的生(shēng)長(cháng)（如種子萌發，愈傷增殖、再生(shēng)等）産生(shēng)任何影響，可視為(wèi)培養基标準配方成份；

3.   PPA主要用于預防和消除來自(zì)空氣、水(shuǐ)源或者人體接觸等外界因素導緻的植物(wù)組培過程中的微生(shēng)物(wù)污染，同時，對于植物(wù)内生(shēng)菌也同樣具有非常好的抑制效果；

4. PPA廣泛适用于絕大多(duō)數被子植物(wù)和裸子植物(wù)，但是不推薦用于蕨類植物(wù)、藻類等水(shuǐ)生(shēng)植物(wù)；

5.   PPA具有熱穩定性，能(néng)直接加入培養基高(gāo)溫滅菌而不會(huì)影響使用效果，使用更加方便；

6.    PPA相(xiàng)對于常規抗生(shēng)素而言，性價比更高(gāo)。

作用機(jī)理：

PPA的活性成分能(néng)滲透細菌或者真菌細胞壁，抑制呼吸作用中三羧酸循環和電(diàn)子傳遞鏈過程中關鍵酶的活性，同時也能(néng)阻斷細菌和真菌吸收和利用培養基中單糖和氨基酸的過程，從(cóng)而實現預防和清除植物(wù)組織培養過程中的微生(shēng)物(wù)污染。

相(xiàng)對抗生(shēng)素的優勢：

1.    PPA能(néng)廣泛抑制和清除細菌和真菌的污染，并防止真菌孢子的萌發；

2.    PPA是通(tōng)過抑制多(duō)種酶的活性而達到(dào)抑菌效果，從(cóng)而能(néng)避免耐藥突變體的發生(shēng)；

3.    PPA具有熱穩定性，無需過濾滅菌，能(néng)直接加入培養基高(gāo)溫滅菌而不會(huì)影響使用效

果，使用更加方便；

4.    PPA性價比更高(gāo)，可更加廣泛的應用于更多(duō)的科學研究、作物(wù)育種、組培苗工(gōng)廠化

生(shēng)産中。

以下(xià)操作說明是針對大多(duō)數情況下(xià)的常規使用說明，必要時，可根據具體植物(wù)樣本情況進行适當調整。

1.    常規用量：

一(yī)般推薦使用使用濃度為(wèi) 0.05%-0.2%（1L 培養基中加入 0.5-2 ml PPA）;

愈傷增殖，器(qì)官形成，胚性組織發育等使用濃度為(wèi) 0.05%-0.075%（1L 培養基中加入 0.5-0.75 ml PPA）。

說明：

(a) 含有 PPA的培養基無需在超淨工(gōng)作台中分裝，在培養基凝固以後将培養瓶/皿蓋子蓋好即可。如使用自(zì)動灌裝系統，建議在灌裝前後将分裝管用高(gāo)壓滅菌熱水(shuǐ)處理；

(b) 如果培養基儲存液保存在無菌容器(qì)中并未經污染的情況下(xià)，加入 PPA配制的培養基無需再次過濾或者高(gāo)溫滅菌。如果是營養培養基，如含有 200 mg/L 甚至更高(gāo)濃度氨基酸或者蛋白(bái)質的培養基，建議過濾滅菌。

2.    植物(wù)内生(shēng)菌污染處理：

(a) 種子：PPA不推薦用于直接處理含有大量的細菌或真菌孢子的種子滅菌，對于種子離體萌發，建議先采用傳統方法消毒，然後置于含 2-3% PPA的全培養基礎鹽溶液中，輕輕攪拌 4-12 小(xiǎo)時，此過程千萬不能(néng)添加 Tween20 和調節 pH，處理完成以後直接插入含有 PPA (草(cǎo)本植物(wù) 0.05-0.1%，木(mù)本植物(wù) 0.2%)的培養基裡(lǐ)；

(b) 外植體：以 1cm 外植體為(wèi)例，将外植體置于含 4-5% PPA的全培養基礎鹽溶液中，輕輕攪拌 4-12 小(xiǎo)時，此過程千萬不能(néng)添加 Tween20 和調節 pH，處理完成以後直接插入含有 PPA (草(cǎo)本植物(wù) 0.05-0.1%，木(mù)本植物(wù) 0.2%)的培養基裡(lǐ)；

(c) 對于塊莖，球莖和鱗狀物(wù)的觀賞植物(wù)樣本：将其整體放(fàng)入傳統消毒劑中攪拌消毒處理以後，用水(shuǐ)沖洗幹淨，将材料切成薄片，置于含 4-5% PPA的全培養基礎鹽培養液中，輕輕攪拌 4-12 小(xiǎo)時，此過程千萬不能(néng)添加 Tween20 和調節 pH，處理完成以後無需沖洗直接插入含有 0.1-0.2%的 PPA的培養基裡(lǐ)進行培養。

3.   如果厚的外植體、污染嚴重的植株、種子等樣本經過以上(shàng)處理仍得不到(dào)理想效果，可嘗試以下(xià)操作：

(a) 将材料浸泡在水(shuǐ)中持續攪拌處理(松軟組織攪拌 1 小(xiǎo)時，硬實組織攪拌 2 小(xiǎo)時)；

(b) 将材料在含 50%的 PPA全培養基礎鹽溶液中攪拌處理 5-10 分鍾，此過程千萬不能(néng)添加 Tween20 和調節 pH；

(c) 無需沖洗，将處理過的材料直接加入到(dào)培養基中即可。對于真菌污染，可在培養基中加入适當濃度的 PPA。對于真菌細菌混合性污染，建議在培養的第一(yī)個(gè)月(yuè)的培養基中加入 0.05%-0.2%的 PPA。

4.    嚴重污染材料污染去除與搶救（重污染不超過一(yī)周）：

(a) 将污染的材料至于流水(shuǐ)中用軟刷刷洗，然後置于含 50% PPA的無菌水(shuǐ)溶液中攪拌

5-15 分鍾，對于細菌或者混合性污染，建議使用 100% PPA與 0.6 g/L 的檸檬酸無菌水(shuǐ)溶液按 1：1 混合的低(dī) pH(2.8-3.2)的酸性溶液處理；

(b) 處理後的材料無需清洗，直接插入含 0.05%-0.25 的 PPA的培養基中培養至少一(yī)個(gè)月(yuè)以上(shàng)，其中前 10 天需要弱光(guāng)培養；對于一(yī)些真菌、孢子和細菌污染隐藏較深，PPA無法接觸到(dào)的部位，建議在初步的清洗以後，将材料切開(kāi)，然後再放(fàng)入含 50% PPA的無菌水(shuǐ)溶液中攪拌 5-15 分鍾處理。

5.    農杆菌的去除：

共培養以後，将樣本用無菌水(shuǐ)清洗，然後将樣本浸沒在 100% PPA（補充 4X 的培養基鹽溶液）中處理 2 分鍾，取出後用無菌紙(zhǐ)吸幹後并置于常用抗性培養基中培養，3 周後，更換到(dào)隻含有 0.05%-0.075% PPA (無常用抗生(shēng)素)的培養基中培養。

使用注意事(shì)項：

1. 在所有 PPA消毒處理外植體的過程中，盡量保證容器(qì)的體積足夠大，并使外植體材料所有面積與含 PPA 的處理溶液充分接觸，以保證消毒效果；

2. 如果外植體出現高(gāo)度氧化現象，不要扔棄，大約 50%的外植體在 4-6 周内即可恢複；

3. 50% PPA的處理溶液可以重複使用但是不推薦，因為(wèi)使用次數和效果受外植體的體積與接種密度的影響。将 50% PPA的處理溶液保存在 4oC可适當延長(cháng)其活性。

4. 如果 50% PPA溶液處理效果不理想，可采用 100% PPA溶液進行處理，處理方法相(xiàng)同，但使用次數不得超過 10 次。

安全說明：

1. 雖然 PPA是無毒性的，但是在使用過程中還(hái)需盡量避免直接與人體皮膚等直接接觸，建議使用時佩戴手套，保持空間空氣流通(tōng)，如不慎吸入，先馬上(shàng)因大量純淨水(shuǐ)後立即就(jiù)醫(yī)，如不慎入眼，立刻用大量水(shuǐ)沖洗眼睛 15 分鍾，用肥皂清洗 PPA接觸過的皮膚部位；

2.  含 PPA的培養基垃圾處理與常規培養基處理方法相(xiàng)同。