植物(wù)脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)
Plant
Proline Assay Kit with Ninhydrin
● 産品組成：
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組分貨号
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名稱
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規格
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貯存
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PP5040-01
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試劑1-Pro裂解液
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125 ml
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RT
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PP5040-02
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試劑2-Pro标準液
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1 ml
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4℃
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PP5040-03
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試劑3-Pro顯色液
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50 ml
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4℃ 避光(guāng)
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● 産品簡介：
脯氨酸(Proline，Pro)是一(yī)種環狀的α-亞氨基酸，呈中性，等電(diàn)點為(wèi)6.30，易溶于水(shuǐ)。在正常環境情況下(xià)脯氨酸含量較低(dī)，但在逆境下(xià)(旱、熱、冷、凍、鹽堿等)，脯氨酸常有明顯積累，即積累指數與植物(wù)的抗逆性有關。植物(wù)脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)檢測原理是脯氨酸與茚三酮共熱發生(shēng)反應，能(néng)産生(shēng)穩定的紅(hóng)色産物(wù)，以分光(guāng)光(guāng)度計測定處吸光(guāng)度，在一(yī)定範圍内顔色深淺(即吸光(guāng)度)與脯氨酸濃度成正比。
該試劑盒不使用甲苯等有害溶劑，經濟環保。
該試劑盒主要用于測定植物(wù)組織中的遊離脯氨酸含量，不适用于動物(wù)及醫(yī)療樣品中脯氨酸的測定。
按照(zhào)一(yī)次使用1 ml Pro顯色液計算(suàn)，試劑盒可以使用50次。
● 自(zì)備材料：
植物(wù)根莖、葉子等；剪刀；螺蓋離心管或鎖蓋離心管或96孔闆；1ml玻璃比色皿；分光(guāng)光(guāng)度計或酶标儀；水(shuǐ)浴鍋或幹浴器(qì)；離心機(jī)
● 操作步驟：
1、 樣本處理：
取新鮮植物(wù)組織，清洗幹淨，擦幹，剪碎，迅速稱取， 按照(zhào)20mg重量加入1ml Pro裂解液（注意是否已經加入無水(shuǐ)乙醇）的比例加入Pro裂解液（建議使用1.5ml螺口離心管或鎖蓋離心管），沸水(shuǐ)浴或幹浴處理20分鍾 (期間間歇混勻)，10000 rpm離心 2分鍾，上(shàng)清即為(wèi)脯氨酸提取液，4℃保存備用。待測提取液如不能(néng)及時測定，應置于-20℃保存，1-2天内穩定。
2、 配制系列脯氨酸标準溶液：
取1ml 試劑1-Pro裂解液全部加入到(dào)試劑2-Pro标準液的小(xiǎo)管中，混勻後徹底溶解，即配成的Pro标準液（100mg/ml）。
取1 μl 100mg/ml 标準液加入到(dào)1ml Pro裂解液中，即配成100μg/ml Pro标準液待用。參照(zhào)下(xià)表配制1-6号不同濃度的Pro标準溶液。
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編号
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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8
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100μg/ml Pro标準液加入量（ml）
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0.01
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0.02
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0.04
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0.06
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0.08
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0.10
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0.15
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0.2
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Pro裂解液（ml）
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0.49
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0.48
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0.46
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0.44
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0.42
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0.4
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0.35
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0.3
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脯氨酸含量（μg）
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1
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2
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4
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6
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8
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10
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15
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20
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4、 樣品測定:
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編号
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0
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1-8
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9-X
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空白(bái)管
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标準管
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測定管
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試劑1-Pro裂解液
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0.5 ml
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-
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-
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步驟1中的脯氨酸提取液
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-
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-
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0.5 ml
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Pro标準液（步驟3中1-8管）
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-
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0.5 ml
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-
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試劑3-Pro顯色液
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1 ml
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1 ml
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1 ml
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③ 水(shuǐ)浴煮沸或幹浴20分鍾，間歇混勻。加熱時務必注意避免液體暴沸濺出，可使用鎖蓋離心管或螺旋蓋離心管。
④ 冰浴或流水(shuǐ)冷卻至室溫，10000 rpm離心 2分鍾，如發現沒有不溶物(wù)，也可以不離心。
⑤ 取上(shàng)清，用空白(bái)管作為(wèi)對照(zhào)，取1ml反應混合液用分光(guāng)光(guāng)度計測定520nm吸光(guāng)度值。
=
6 \* GB3 ⑥ 酶标儀測定：參考下(xià)表設置反應混合液，依次加入試劑：
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空白(bái)管
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标準管
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測定管
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試劑1-Pro裂解液
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50 μl
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-
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-
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步驟1中的脯氨酸提取液
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-
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-
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50 μl
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Pro标準液（步驟3中1-8管）
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-
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50 μl
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-
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試劑3-Pro顯色液
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100 μl
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100 μl
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100 μl
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5、 計算(suàn)：
以系列脯氨酸标準(1-8号管)含量(μg)為(wèi)橫坐标，以對應的吸光(guāng)度為(wèi)縱坐标，制作标準曲線，根據測定管的吸光(guāng)度進而計算(suàn)其脯氨酸含量。
如使用分光(guāng)光(guāng)度計測定，根據如下(xià)公式計算(suàn)具體樣品中脯氨酸的含量：
植物(wù)組織樣品脯氨酸含量(μg/g)=1.5（C×VT）/(W×VS) =3C/W
VT=步驟1中脯氨酸提取液總體積(ml)，此處為(wèi)1ml
W=步驟1中使用的樣品鮮重(g)
VS=步驟4中測定時加入的脯氨酸提取液體積(ml)，本實驗為(wèi)0.5ml
1.5系數為(wèi)步驟4中反應混合液體積為(wèi)1.5ml，取1ml測定吸光(guāng)值
