Western無蛋白(bái)快速封閉液

Protein Free Rapid Blocking Buffer for WB

● 産品組成：

● 産品簡介：

本産品專為(wèi)快速高(gāo)效封閉Western Blot 轉印膜而設計，采用無蛋白(bái)配方，避免抗體與封閉劑的非特異結合，最大程度地降低(dī)了背景。同時，本封閉劑無内源的磷酸化蛋白(bái)及生(shēng)物(wù)素，對磷酸化特異抗體及生(shēng)物(wù)素檢測也不會(huì)産生(shēng)幹擾。本封閉劑不與蛋白(bái)産生(shēng)非特異性結合，因而隻封閉膜而不會(huì)屏蔽樣品蛋白(bái)的抗體識别位點，大大提高(gāo)了抗體檢測靈敏度。實驗表明，本封閉劑對許多(duō)抗體都有不同程度的信号增強作用。然而這種信号增強作用因抗體而異，對某一(yī)特定抗體，并不一(yī)定具有确定的信号增強作用。

注意： 沒有任何一(yī)種封閉劑能(néng)适合所有抗原和抗體的檢測系統。如出現本試劑不适合的抗體，請替換使用其它種類的封閉劑如BSA或脫脂奶粉等。

● 貯存：

  2-8℃貯存，有效期一(yī)年(nián)。

● 注意事(shì)項：

1. 快速高(gāo)效：10-60 min内完成封閉；隻結合封閉轉印膜而不結合蛋白(bái)，因此不會(huì)屏蔽樣品蛋白(bái)的抗體識别位點，與傳統的脫脂奶粉和BSA 封閉相(xiàng)比信噪比更高(gāo)；

2. 方便快捷：無需稀釋，即取即用；

3. 性能(néng)可靠：無蛋白(bái)配方，與抗體無交叉反應；

4. 應用範圍廣：無磷酸化蛋白(bái)，無生(shēng)物(wù)素，尤其适合磷酸化特異抗體及生(shēng)物(wù)素檢測系統；

5. 節省抗體：使用本封閉劑後，所需的最适抗體濃度低(dī)于常規使用濃度，可大大節省抗體使用量。

6. 與PVDF膜相(xiàng)比，NC膜需要更長(cháng)時間的封閉。

● 使用說明：

1. 本産品無需稀釋，開(kāi)蓋即用。

2. 完成轉膜後，使用TBST漂洗轉印膜3次，每次5分鍾；

3. 将轉印膜放(fàng)入到(dào)雜(zá)交孵育盒中，加入10-20 ml 無蛋白(bái)快速封閉液完全覆蓋轉印膜，置于搖床輕輕搖動，參考下(xià)表确定封閉時間：

注意：使用本産品，PVDF膜和NC膜使用推薦封閉時間，經多(duō)種抗體的測試封閉效果顯著優于常規的BSA封閉1 h。對于一(yī)些背景非常高(gāo)的抗體，可以嘗試延長(cháng)封閉時間。如有特殊需要，也可4℃封閉過夜。

● 實驗示例：

Jurkat細胞總蛋白(bái)GAPDH檢測

電(diàn)泳條件(jiàn)：200 V 1×TGS 40-12 mA 53 min

轉膜條件(jiàn)：NC膜，1×RealBlot快速轉膜液(Cat:RT5020)

植物(wù)葉綠體LHCa3檢測

Electrophoresis: 10% RealPAGE SDS Electrophorosis(RTD6148)

Transfer: 1×RealBlot transfer buffer(Cat:RT5020)

               350 mA blotting to NC membrane for 30 min.

Blocking: 無蛋白(bái)封閉液（Cat:PF1070） RT  for 20 min;

BSA at RT for 1 h.

Primary antibody: Lhca3（Cat:RGL2080） 1:2000 dilution at RT for 1h

Secondary antibody: 1:5000 dilution using Goat Anti-Rabbit IgG AP(Cat:AGR1030)

                Detection: using BCIP/NBT(Cat:BN1026) at RT for 5 min