碘化丙啶染色液（Propidium Iodide Staining Solution）

●  産品組成：

● 産品簡介：

碘化丙啶(propidium iodide，PI)，分子式C₂₇H₃₄I₂N₄ ，MW 668.39，CAS：25535-16-4。碘化丙啶不能(néng)穿過完整的活細胞膜，即正常細胞和凋亡細胞在不固定的情況下(xià)對PI拒染，而壞死細胞由于失去膜的完整性，PI可進入細胞内與DNA結合，根據此特點，使用PI染色可鑒别死細胞。如果使用PI對活細胞染色必須在染色前進行固定，以增加細胞膜對染料的通(tōng)透性。PI經常被用來與 Calcein-AM 或者 FDA等熒光(guāng)探針一(yī)起使用，能(néng)同時對活細胞和死細胞染色。 PI-DNA複合物(wù)的激發和發射波長(cháng)分别為(wèi) 535 nm 和615 nm。常用于流式細胞儀分析和顯微鏡觀察，檢測細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)。

本産品為(wèi) PI 水(shuǐ)溶液，濃度為(wèi) 1 mg/ml（1.5 mM）。使用時根據實驗不同直接将本産品用相(xiàng)應溶液稀釋到(dào)工(gōng)作濃度。

● 貯存：

-20℃保存，一(yī)年(nián)有效。

● 操作步驟：

一(yī) 懸浮細胞染色

1.1 500 g（2400 rpm，下(xià)同）離心收集細胞樣品于1.5 ml離心管内，加入0.5 ml固定液（貨号：KA5010，卡諾固定液），緩緩懸起細胞，常溫固定10分鍾或更長(cháng)時間(可4℃過夜)。

1.2離心去盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分鍾，洗滌期間手動晃動數次。

1.3 細胞沉澱中加入200μl 1×PBS重懸，加入10 μl 碘化丙啶染色液，37℃避光(guāng)染色10-15分鍾，手動晃動數次。

1.4 離心收集沉澱，重懸于100 μl 1×PBS中。

1.5 取5 μl抗熒光(guāng)淬滅封片液（貨号：AM0510）于載玻片上(shàng)，加入等體積步驟1.4染色後細胞重懸液，蓋上(shàng)一(yī)潔淨的蓋玻片，盡量避免氣泡。

1.6 熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察可檢測到(dào)呈紅(hóng)色的細胞核。激發波長(cháng)為(wèi)535 nm，發射波長(cháng)為(wèi)615 nm。

注：熒光(guāng)染料都存在淬滅的問題，建議染色後盡快檢測。

二 貼壁細胞染色

2.1 取潔淨蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鍾或更長(cháng)時間，無菌超淨台内吹幹或用無菌的PBS洗滌三遍，再用細胞培養液洗滌一(yī)遍。将蓋玻片置于六孔闆内，種入細胞培養過夜，生(shēng)長(cháng)至50%-80%滿度。

2.2刺激細胞發生(shēng)凋亡後，吸盡培養液，加入0.5 ml固定液，固定10分鍾或更長(cháng)時間(可4℃過夜)。

2.3去盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分鍾，吸盡液體。洗滌時宜用搖床或手動晃動。

2.4加入0.5 ml PBS，加入25 μl碘化丙啶染色液，37℃避光(guāng)染色10-15分鍾，手動晃動數次。

2.5去盡染色液，用PBS洗兩遍，每次3分鍾，吸盡液體。洗滌時宜用搖床或手動晃動。

2.6滴一(yī)滴抗熒光(guāng)淬滅封片液（貨号：AM0510）于載玻片上(shàng)，蓋上(shàng)貼有細胞的蓋玻片，讓細胞接觸封片液，盡量避免氣泡。

2.7熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察可檢測到(dào)呈紅(hóng)色的細胞核。激發波長(cháng)為(wèi)535 nm，發射波長(cháng)為(wèi)615 nm。

注：熒光(guāng)染料都存在淬滅的問題，建議染色後盡快檢測。

● 實驗示例：

操作流程： 胰酶消化液消化，計數2×10⁶/ml