Hochest 33342活細胞染色液（100×）
Hoechst 33342 Staining
Solution for Live Cells(100×)
● 産品組成：
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貨号
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名稱
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規格
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HE1014S
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Hochest
33342活細胞染色液（100×）
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0.5
ml
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說明書
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一(yī)份
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● 産品簡介：
Hoechst 33342，也稱bisBenzimide
H 33342 或HOE 33342，分子式為(wèi)C27H28N6O·3HCl
，分子量MW561.93，CAS:
23491-52-3，是一(yī)種可以穿透細胞膜的藍色熒光(guāng)染料，對細胞的毒性較低(dī)。Hoechst
33342 專一(yī)性地與雙鏈DNA結合（優先結合AT），常用于細胞核染色。染色後可以用熒光(guāng)顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33342 的最大激發波長(cháng)為(wèi)346 nm（紫外激發），最大發射波長(cháng)為(wèi)460nm（藍色熒光(guāng)）；Hoechst 33342 和雙鏈DNA 結合後，最大激發波長(cháng)為(wèi)350nm，最大發射波長(cháng)為(wèi)461nm。另外，由于Hoechst 33342專一(yī)性結合DNA，不與RNA結合，樣品無需使用RNase處理。與DAPI相(xiàng)比，Hoechst
33342具有更好的膜通(tōng)透性，更适合于活細胞的染色。
Hoechst 33342和Hoechst
33258相(xiàng)比，Hoechst 33342對細胞的毒性作用更小(xiǎo)一(yī)些，33258穿透能(néng)力較33342弱，染活細胞時容易被"泵出"，也就(jiù)是拒染。所以一(yī)般來說Hoechst 33258用于細胞固定後再染色，而Hoechst33342則可以對活細胞直接進行染色。
本染色液為(wèi)100×濃度，使用終濃度為(wèi)1×，可直接用于活細胞或組織的細胞核染色，也可稀釋後用于固定細胞或組織的細胞核染色。
● 貯存：
-20℃避光(guāng)保存，一(yī)年(nián)有效。
● 操作步驟：
一(yī). 活細胞染色：
1.1 貼壁細胞：
1.1.1在培養液中均勻滴加适量的Hoechst 33342活細胞染色液(100×)至終濃度為(wèi)1×，輕柔混勻。例如對于十二孔闆中培養的貼壁細胞，每孔有1 ml的培養液，每孔需要加入10 μl Hoechst 33342活細胞染色液(100×)。培養液中的血清、酚紅(hóng)等都不會(huì)對染色産生(shēng)幹擾。
1.1.2在适宜于細胞培養的溫度孵育10分鍾，可以直接在熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察。如果考慮到(dào)培養液對觀察效果的影響，進行以下(xià)操作步驟。
1.1.3吸除含染料的培養液，用PBS洗滌2-3次即可在熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察。
注：為(wèi)避免凋亡細胞随培養液或PBS被吸除，在吸除液體前，對于用多(duō)孔闆中培養的細胞，最好用多(duō)孔闆離心機(jī)離心一(yī)下(xià)以充分沉澱那些已經漂浮起來的凋亡細胞。細胞發生(shēng)凋亡時，會(huì)看(kàn)到(dào)凋亡細胞的細胞核呈緻密濃染，或呈碎塊狀緻密濃染。
1.2. 懸浮細胞：
1.2.1 在懸浮細胞培養液中加入适量的Hoechst 33342活細胞染色液(100×)至終濃度為(wèi)1×，輕柔混勻。例如對于12孔闆中培養的貼壁細胞，每孔有1 ml的培養液，每孔需要加入10 μl Hoechst 33342活細胞染色液(100×)。培養液中的血清、酚紅(hóng)等都不會(huì)對染色産生(shēng)幹擾。
1.2.2 在适宜于細胞培養的溫度孵育10分鍾，可以直接在熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察。如果考慮到(dào)培養液對觀察效果的影響，進行以下(xià)操作步驟。
1.2.3将細胞轉移到(dào)1.5 ml離心管中，500 g 離心5分鍾收集細胞。細胞沉澱用PBS洗兩遍，每次3分鍾，吸盡液體。
1.2.4細胞沉澱中加入100-200 μl PBS，重懸沉澱。
1.2.6取5
μl抗熒光(guāng)淬滅封片液于載玻片上(shàng)，加入等體積步驟1.2.4染色後細胞重懸液，蓋上(shàng)一(yī)潔淨的蓋玻片，盡量避免氣泡。
1.2.6 熒光(guāng)顯微鏡使用紫外激發，可檢測到(dào)呈藍色的細胞核。激發波長(cháng)350nm左右，發射波長(cháng)460nm左右。
注：熒光(guāng)染料都存在淬滅的問題，建議染色後盡快檢測。
二. 實驗示例:
染色程序：
Jurkat細胞密度調整到(dào)1×106/ml，六孔闆接種2 ml，加入10 μl STS（星孢菌素）至終濃度1 μM
37度培養3小(xiǎo)時；加入20 μl Hochest 33342活細胞染色液（100×），RT避光(guāng)染色15分鍾，熒光(guāng)顯微鏡直接觀察。左圖為(wèi)正常細胞（10×），右圖為(wèi)STS誘導凋亡的細胞（10×）。
染色程序：
左為(wèi)明場 20×相(xiàng)差；右為(wèi)紫外激發
293細胞消化後調整密度為(wèi)1×105/ml；12孔闆，每孔接種1 ml，37度培養30小(xiǎo)時；加入10 μl Hochest 33342活細胞染色液（100×）；37度培養10分鍾，直接觀察。